食品衛(wèi)生微生物學(xué)蠟樣芽胞桿菌檢驗操作步驟
⒈樣品處理
冷凍樣品應(yīng)在45℃以下不超過15 min或在2℃～8℃不超過18 h解凍。若不能及時檢驗，應(yīng)放于-15℃左右保存；
非冷凍而易腐的樣品應(yīng)盡可能及時檢驗。若不能及時檢驗，應(yīng)置于2℃～8℃冰箱保存，在24 h內(nèi)檢驗。
⒉樣品制備
以無菌操作取樣品25 g（mL），加入PBS 225 mL，用旋轉(zhuǎn)刀片式均質(zhì)器以8000 r/min～10000 r/min均質(zhì)1 min～2 min，或拍擊式均質(zhì)器拍擊2 min。如無均質(zhì)器，則將樣品放入無菌乳缽中磨碎，然后稱取25 g（mL）置合適的容器中，加225 mL PBS，充分振蕩混勻。制成1:10的樣品勻液。
⒊增菌
取1：10的樣品勻液10 mL（液體樣品可以選擇原液），加入90 mL胰酪胨大豆多粘菌素肉湯中，于30 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h±2 h。
⒋分離
取胰酪胨大豆多粘菌素增菌液劃線接種于MYP瓊脂平板上。于30 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h～48 h。觀察平板上生長的菌落。在MYP瓊脂平板上，典型菌落為灰白色至微粉紅色，周圍有白色至淡粉紅色沉淀環(huán)。
⒌純培養(yǎng)
從每個平板選取至少5個典型或可疑菌落，劃線接種于營養(yǎng)瓊脂平板做純培養(yǎng)，30 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h±2 h，進行確證實驗。營養(yǎng)瓊脂平板上，典型菌落在為灰白色，偶有黃綠色，不透明，表面粗糙似毛玻璃狀或融蠟狀，邊緣常呈擴展狀，直徑為4 mm～10 mm；
⒍樣品的稀釋
吸取1：10的樣品勻液1 mL加到裝有9 mL PBS的稀釋管中，充分混勻制成1：100的樣品勻液。據(jù)對樣品污染狀況的估計，按上述操作，依次制成十倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋1次，換用1支1mL無菌吸管或吸頭。
⒎平板計數(shù)
⑴選擇2～3個適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液（液體樣品可以選擇原液），每個稀釋度分別吸取0.1mL接種到MYP瓊脂平板上，每稀釋度接種兩個MYP瓊脂平板。用無菌L棒涂布整個平板，注意不要觸及平板邊緣。使用前，如MYP瓊脂平板表面有水珠，可放在25℃ ～ 50℃的培養(yǎng)箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。
⑵涂布后，將平板置于30 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h±2 h后（原標準為36 ℃±1 ℃培養(yǎng)12 h～20 h） ，選取具有15個～150個典型或可疑蠟樣芽胞桿菌菌落的平板，進行計數(shù)。并計算同一稀釋度兩個平板的平均菌落數(shù)。如果菌落不典型，可繼續(xù)培養(yǎng)18 h～24 h再計數(shù)。
⑶計數(shù)后，從每個平板選取至少5個已計數(shù)的典型或可疑菌落，如果一個平板上少于5個典型或可疑菌落，則取所有典型或可疑菌落，分別劃線接種于營養(yǎng)瓊脂平板，30 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h±2 h，進行確證實驗。
⑷根據(jù)確證實驗確定為蠟樣芽胞桿菌的菌落數(shù)，按比例計算出該平板上蠟樣芽胞桿菌菌落數(shù)，然后計算同一稀釋度兩個平板的平均蠟樣芽胞桿菌數(shù)，再乘其稀釋倍數(shù)，再乘以10，即得每g（mL）樣品中蠟樣芽胞桿菌數(shù)并作出報告。