微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)施與設(shè)備！
小楊 / 2020-10-15 08:49:27
微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)施與設(shè)備是開(kāi)展微生物檢測(cè)的物質(zhì)基礎(chǔ)和保證。因此開(kāi)展微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，離不開(kāi)實(shí)驗(yàn)室設(shè)施與設(shè)備。但光有實(shí)驗(yàn)室設(shè)施與設(shè)備，而沒(méi)有對(duì)實(shí)驗(yàn)室設(shè)施與設(shè)備的性能進(jìn)行檢測(cè)的驗(yàn)證，同樣起不到保證作用。
一、微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)施與設(shè)備
1、保證檢測(cè)的無(wú)菌環(huán)境設(shè)施與器械︰如潔凈室(無(wú)菌室)、無(wú)菌隔離系統(tǒng)、凈化工作臺(tái)等；
2、保證檢測(cè)用實(shí)驗(yàn)用品與用具的無(wú)菌(滅菌)設(shè)施或設(shè)備﹔如高壓蒸汽滅菌器、電熱恒溫干燥箱等；
3、保證檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素反應(yīng)的器械用具∶如各種細(xì)菌內(nèi)毒素反應(yīng)測(cè)定儀；
4、保證檢測(cè)中微生物能恒溫生長(zhǎng)與菌種保存的恒溫設(shè)備︰如恒溫培養(yǎng)箱、冰箱；
5、各種實(shí)驗(yàn)操作所用儀器∶全封閉薄膜過(guò)濾裝置、電動(dòng)勻漿儀、電熱恒溫水浴箱、離心機(jī)、天平、顯微鏡等；
6、實(shí)驗(yàn)操作所用的玻璃器具∶各種刻度吸管、移液管、容量瓶、試管、三角燒瓶、雙碟培養(yǎng)皿等常用玻璃器具；
7、測(cè)量樣品中微生物菌落數(shù)或其他有關(guān)測(cè)量?jī)x∶如空氣浮游菌采樣器、空氣懸浮粒子計(jì)數(shù)器等。
二、潔凈室(無(wú)菌室)
潔凈室(無(wú)菌室)是微生物檢測(cè)的重要場(chǎng)所與最基本的設(shè)施。它是微生物檢測(cè)質(zhì)量保證的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。因此它的設(shè)計(jì)要按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)一2013《潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)》、國(guó)家藥品監(jiān)督管理局頒發(fā)的《藥品檢驗(yàn)所實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理規(guī)范(試行)》中第十八條規(guī)定執(zhí)行。微生物實(shí)驗(yàn)室潔凈室的施工、安裝、驗(yàn)收應(yīng)按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 50591-2010《潔凈室的施工及驗(yàn)收規(guī)范》執(zhí)行。對(duì)于微生物檢測(cè)工作者和使用管理者來(lái)講，更大量的工作是進(jìn)行正常管理到日常的使用。潔凈室(無(wú)菌室)的標(biāo)準(zhǔn)要符合GMP潔凈度標(biāo)準(zhǔn)要求。
具體級(jí)別標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)下表。
1、我國(guó)GMP實(shí)施指南提出的潔凈室（無(wú)菌室）級(jí)別
2、潔凈室(無(wú)菌室)的使用管理要求
⑴潔凈室(無(wú)菌室)要符合規(guī)范要求
無(wú)菌室應(yīng)采光良好、避免潮濕、遠(yuǎn)離廁所及污染區(qū)。面積一般不超過(guò)10m2，不小于5m2；高度不超過(guò)2.4m。由1～2個(gè)緩沖間、操作間組成(操作間和緩沖間的門(mén)不應(yīng)直對(duì))，操作間和緩沖間之間應(yīng)具備滅菌功能的樣品傳遞箱。在緩沖間內(nèi)應(yīng)有洗手盆、毛巾、無(wú)菌衣褲放置架及掛鉤、拖鞋等，不應(yīng)放置培養(yǎng)箱和其他雜物;無(wú)菌室內(nèi)應(yīng)六面光滑平整，能耐受清洗消毒。墻壁與地面、天花板連接處應(yīng)呈凹弧形，無(wú)縫隙，不留死角。操作間內(nèi)不應(yīng)安裝下水道。
無(wú)菌操作室應(yīng)具有空氣除菌過(guò)濾的單向流空氣裝置，操作區(qū)潔凈度100級(jí)或放置同等級(jí)別的超凈工作臺(tái)，室內(nèi)溫度控制18～26℃，相對(duì)濕度45%～65%。緩沖間及操作室內(nèi)均應(yīng)設(shè)置能達(dá)到空氣消毒效果的紫外燈或其他適宜的消毒裝置，空氣潔凈級(jí)別不同的相鄰房間之間的靜壓差應(yīng)大于5Pa，潔凈室(區(qū))與室外大氣的靜壓差大于10Pa。無(wú)菌室內(nèi)的照明燈應(yīng)嵌裝在天花板內(nèi)，室內(nèi)光照應(yīng)分布均勻，光照度不低于300lx。緩沖間和操作間所設(shè)置的紫外線殺菌燈(2～2.5W/m3)應(yīng)定期檢查輻射強(qiáng)度，要求在操作面上達(dá)40uw/cm2。不符合要求的紫外殺菌燈應(yīng)及時(shí)更換。
⑵建立使用登記制度
微生物測(cè)檢驗(yàn)室要建立使用登記制度。在登記冊(cè)中可設(shè)置以下項(xiàng)目?jī)?nèi)容:如使用日期、時(shí)間、使用人、設(shè)備運(yùn)行狀況、溫度、濕度、潔凈度狀態(tài)(沉降菌數(shù)、浮游菌數(shù)、塵埃粒子數(shù))、報(bào)修原因、報(bào)修結(jié)果、清潔工作(臺(tái)面、地面、墻面、天花板、傳遞窗、門(mén)把手)、消毒液名稱等。
⑶建立使用標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范(SOP)并嚴(yán)格管理
SOP內(nèi)容至少要有以下幾點(diǎn)：
①規(guī)定凈化系統(tǒng)的運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)間要求:每次實(shí)驗(yàn)前應(yīng)開(kāi)啟凈化系統(tǒng)使運(yùn)轉(zhuǎn)至少1h以上，同時(shí)開(kāi)啟凈化臺(tái)和紫外燈。
②物品進(jìn)入潔凈室(無(wú)菌室)基本要求:凡進(jìn)人潔凈室(無(wú)菌室)的物品，必須先在第一緩沖間內(nèi)，對(duì)外部表面用消毒劑消毒滅菌，再經(jīng)物流緩沖間、傳遞窗1h以上，及無(wú)菌空氣吹干后送入無(wú)菌室。注意帶纖維、易發(fā)塵物品不得帶進(jìn)凈化實(shí)驗(yàn)室。無(wú)菌室內(nèi)固定物品不得任意搬出。
③人員進(jìn)入潔凈室(無(wú)菌室)要求:實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入潔凈室(無(wú)菌室)不得化妝、帶手表、戒指等首飾;不得吃東西、嚼口香糖。應(yīng)清潔手后進(jìn)入第一緩沖間更衣，同時(shí)換上消毒隔離拖鞋，脫去外衣，用消毒液消毒雙手后戴上無(wú)菌手套，換上無(wú)菌連衣帽(不得讓頭發(fā)、衣等暴露在外面)，戴上無(wú)菌口罩。然后，換上或再戴上第二副無(wú)菌手套，在進(jìn)入第二緩沖間時(shí)換第二雙消毒隔離拖鞋。再經(jīng)風(fēng)淋室30s風(fēng)淋后進(jìn)入無(wú)菌室。
④溫濕度觀察要求:觀察溫度計(jì)、濕度計(jì)上顯示的溫濕度是否在規(guī)定的范圍內(nèi)，并作為實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)己錄在案。如發(fā)現(xiàn)問(wèn)題應(yīng)及時(shí)尋找原因，及時(shí)報(bào)修和及時(shí)報(bào)告實(shí)驗(yàn)室主管，并將報(bào)修原因和結(jié)果記錄歸檔。
⑤沉降菌落計(jì)數(shù)與浮游菌測(cè)定要求:在每次實(shí)驗(yàn)同時(shí)，對(duì)操作室和層流臺(tái)做微生物沉降菌落計(jì)數(shù)，將結(jié)果記錄在使用登記本上，并作為實(shí)驗(yàn)環(huán)境原始數(shù)據(jù)記錄在實(shí)驗(yàn)報(bào)告上。每周1次，或在無(wú)菌檢查等必要時(shí)，在每次實(shí)驗(yàn)同時(shí)對(duì)操作室和凈化臺(tái)進(jìn)行浮游菌測(cè)定，將結(jié)果記錄在使用登記本上，并作為實(shí)驗(yàn)環(huán)境原始數(shù)據(jù)記錄在實(shí)驗(yàn)報(bào)告上。
⑥消毒要求:無(wú)菌室每周和每次操作前用0.1%新潔爾滅或2%甲酚液或其他適宜消毒液擦拭操作臺(tái)及可能污染的死角。
方法∶用無(wú)菌紗布浸漬消毒溶液清潔超凈臺(tái)的整個(gè)內(nèi)表面、頂面以及無(wú)菌室、人流、物流、緩沖間的地板、傳遞窗、門(mén)把手。
消毒程序∶應(yīng)從內(nèi)向外，從高潔凈區(qū)到低潔凈區(qū)，逐步向外退出潔凈區(qū)域。然后開(kāi)啟無(wú)菌空氣過(guò)濾器及紫外燈殺菌1～2h，以殺滅存留微生物。在每次操作完畢，同樣用上述消毒溶液擦拭工作臺(tái)面，除去室內(nèi)濕氣，用紫外燈殺菌30min。
常用消毒劑的品種有:5～20倍稀釋的碘伏水溶液、0.1%新潔爾滅溶液、1：50的84消毒液、75%乙醇溶液、3%碘酒溶液、5%石炭酸(來(lái)蘇兒）消毒溶液、2%戊二醛水溶液、尼泊金乙醇消毒液等。
所用的消毒劑品種與使用要進(jìn)行有效性驗(yàn)證方可使用，并定期更換消毒劑的品種。
尼泊金乙醇消毒液處方:對(duì)羥基苯甲酸甲酯21.5g ,對(duì)羥基苯甲酸丙酯8.6g，75%乙醇10.0ml.
⑦其他要求:如遇停電，應(yīng)立即停止實(shí)驗(yàn)，離開(kāi)無(wú)菌室。關(guān)閉所有電閘。重新進(jìn)入無(wú)菌室前至少開(kāi)啟機(jī)房運(yùn)轉(zhuǎn)1h以上。
⑷潔凈度檢查的要求與方法無(wú)菌室在消毒處理后，無(wú)菌試驗(yàn)前及操作過(guò)程中需檢查空氣中菌落數(shù)，以此判斷無(wú)菌室是否達(dá)到規(guī)定的潔凈度，常有沉降菌和浮游菌測(cè)定方法。
①沉降菌檢測(cè)方法及標(biāo)準(zhǔn):以無(wú)菌方式將3個(gè)營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板帶入無(wú)菌操作室，在操作區(qū)臺(tái)面左、中、右各放1個(gè)；打開(kāi)平板蓋，在空氣中暴露30min后將平板蓋好，置32.5℃士2.5℃培養(yǎng)48h，取出檢查，3個(gè)平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)平均小于1個(gè)。
②浮游菌檢測(cè)方法及標(biāo)準(zhǔn):用專門(mén)的采樣器，宜采用撞擊法機(jī)制的采樣器。一般采用狹縫式或離心式采樣器，并配有流量計(jì)和定時(shí)器，嚴(yán)格按儀器說(shuō)明書(shū)的要求操作并定時(shí)校檢，采樣器和培養(yǎng)皿進(jìn)入被測(cè)房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，使用的培養(yǎng)基為營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或藥典認(rèn)可的其他培養(yǎng)基。使用時(shí)，先開(kāi)動(dòng)真空泵抽氣，時(shí)間不少于5min，調(diào)節(jié)流量、轉(zhuǎn)盤(pán)、轉(zhuǎn)速，關(guān)閉真空泵，放入培養(yǎng)皿，蓋上采樣器蓋子后調(diào)節(jié)縫隙高度。置采樣口采樣點(diǎn)后，依次開(kāi)啟采樣器、真空泵，轉(zhuǎn)動(dòng)定時(shí)器，根據(jù)采樣量設(shè)定采樣時(shí)間。全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿置32.5℃±2.5℃培養(yǎng)48h，取出檢查，浮游菌落數(shù)平均不得超過(guò)5個(gè)/m3.每批培養(yǎng)基應(yīng)選定3只培養(yǎng)皿做對(duì)照培養(yǎng)。無(wú)菌操作臺(tái)面或超凈工作臺(tái)還應(yīng)定期檢測(cè)其懸浮粒子，應(yīng)達(dá)到100級(jí)(—般用塵埃粒子計(jì)數(shù)儀)檢測(cè)，并根據(jù)無(wú)菌狀況必要時(shí)置換過(guò)濾器。
⑸定期進(jìn)行潔凈度再驗(yàn)證定期(每季度、半年、1年)或當(dāng)潔凈室設(shè)施發(fā)生重大改變時(shí)，要按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/ T16292—16294-2010《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法》進(jìn)行潔凈度再驗(yàn)證，以確保潔凈度符合規(guī)定，保存驗(yàn)證原始記錄，定期歸檔保存，并將驗(yàn)證結(jié)果記錄在無(wú)菌室使用登記冊(cè)上，作為實(shí)驗(yàn)環(huán)境原始依據(jù)及趨勢(shì)分析資料。并定期對(duì)潔凈室的環(huán)境檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行趨勢(shì)分析和評(píng)估，根據(jù)評(píng)估結(jié)果，了解潔凈室設(shè)施環(huán)境質(zhì)量的穩(wěn)定狀況及變化榜勢(shì)，決定是否有必要修訂相應(yīng)的警戒和糾偏限度。
⑹定期更換新的紫外燈管、更換凈化系統(tǒng)的初效、中效、高效頭定期(至少每年1次)更換新的紫外燈管，以確保確保紫外燈管滅菌持續(xù)有效，并同時(shí)在使用登記本上做好更換紀(jì)錄，定期歸檔保存。至少2年1次，或按潔凈度驗(yàn)證實(shí)際情況，定期更換初效、中效、高效頭，以確保凈化系統(tǒng)的功能持續(xù)有效，并同時(shí)在使用登記本上做好更換記錄，定期歸檔保存。
⑺使用過(guò)程中應(yīng)盡可能減少人員的走動(dòng)或活動(dòng)平時(shí)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)盡可能減少人員的走動(dòng)或活動(dòng)，同向潔凈室的門(mén)要關(guān)閉或安裝自動(dòng)閉門(mén)器使其保持關(guān)閉狀態(tài)。
⑻潔凈度不符合規(guī)定時(shí)立即停止使用發(fā)現(xiàn)潔凈度不符合規(guī)定時(shí)，應(yīng)立即停止使用，尋找原因，徹底清潔，必須經(jīng)潔凈度再驗(yàn)證符合規(guī)定后才再使用，并同時(shí)將情況記錄在無(wú)菌室使用登記冊(cè)上，定期歸檔保存。
⑼對(duì)進(jìn)入的外來(lái)人員或維修人員進(jìn)行指導(dǎo)和監(jiān)督非微生物室檢驗(yàn)人員不得進(jìn)入潔凈室(無(wú)菌室)，對(duì)必須進(jìn)入的外來(lái)人員或維修人員要進(jìn)行指導(dǎo)和監(jiān)督。
⑽潔凈室(無(wú)菌室)的日常管理建立安全衛(wèi)生值日制度，一旦發(fā)現(xiàn)通風(fēng)系統(tǒng)、墻壁、天花板、地面、門(mén)窗及公用介質(zhì)系統(tǒng)等設(shè)施有損壞現(xiàn)象，要及時(shí)報(bào)告并采取相應(yīng)的修復(fù)措施，并保存記錄及時(shí)歸檔。從潔凈室(無(wú)菌室)環(huán)境中檢測(cè)到的微生物應(yīng)能鑒別至屬或種，保留鑒別實(shí)驗(yàn)原始記錄及菌種，作為無(wú)菌生產(chǎn)、無(wú)菌檢查潔凈室環(huán)境質(zhì)量、消毒劑有效性評(píng)估及污染源調(diào)查的依據(jù)，并且也是為無(wú)菌檢查陽(yáng)性結(jié)果的調(diào)查提供第一手資料。
三、局部100級(jí)控制室
微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室離不開(kāi)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌種以及所檢測(cè)的菌種進(jìn)行各種處理，如轉(zhuǎn)接種、制備、鑒定、保藏和進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證;或?qū)ε囵B(yǎng)基靈敏度檢查及陽(yáng)性對(duì)照用菌株的接種以及抗生索效價(jià)測(cè)定用菌種的制備等;或必要時(shí)對(duì)樣品中檢出的或從潔凈環(huán)境中分離到的微生物進(jìn)行分類鑒別，此外有些實(shí)驗(yàn)還要自制生物指劑。這些活動(dòng)就直接要接觸處理微生物菌種，如果菌種控制或操作不當(dāng)，會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染或菌種間交叉污染。因此，菌種處理和微生物鑒別室必須與其他的微生物檢查用潔凈室嚴(yán)格分開(kāi)。
局部100級(jí)控制室通常應(yīng)是由1個(gè)半無(wú)菌操作間和1個(gè)緩沖間組成的無(wú)菌室設(shè)施。室內(nèi)安裝滅菌紫外燈。按實(shí)驗(yàn)微生物性質(zhì)的需要保持對(duì)該室的相對(duì)正壓或相對(duì)負(fù)壓。半無(wú)菌操作室的潔凈度要求為10000級(jí)，凈化層流臺(tái)作為操作時(shí)的局部要求為100級(jí)潔凈度，必要時(shí)可改用生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，有關(guān)微生物暴露性棵作活動(dòng)盡可能在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。菌種處理和微生物鑒別室的環(huán)境檢測(cè)及使用管理的要求與潔凈室的基本要求相同。每次試撿結(jié)束后要對(duì)無(wú)菌室、層流臺(tái)或生物安全柜及整個(gè)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行消毒，人員離開(kāi)后，打開(kāi)紫外燈消毒。所有與菌種相關(guān)的試驗(yàn)廢棄物均應(yīng)經(jīng)過(guò)滅菌處理(在121℃下處理30min以上)后方可丟棄。
使用管理中應(yīng)注意制定與菌種處理相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。此外，還包括生物安全柜的使用標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程、帶菌廢棄物的處理標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程以及環(huán)境消毒等的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。
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