百歐博偉生物 在藥品的生產(chǎn)、包裝、運(yùn)輸、存儲(chǔ)等環(huán)節(jié)中，一些外在的因素會(huì)造成微生物對(duì)藥品的污染，進(jìn)而對(duì)人體造成各種危害。非無(wú)菌藥品微生物限度檢查是對(duì)非滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度的一種檢查方法。本文就該檢查方法所受到的影響因素進(jìn)行了分析，以期最大限度地保證檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。
藥品是防病治病、保護(hù)人民健康的特殊商品。對(duì)非無(wú)菌藥品，可允許該藥品含有一定數(shù)量的活的微生物，但其含菌數(shù)量不能超過(guò)《中國(guó)藥典》2015年版四部通則規(guī)定的非無(wú)菌藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)。
在藥品的生產(chǎn)、包裝、運(yùn)輸、存儲(chǔ)等環(huán)節(jié)中，由于空氣、水、原輔料、包裝材料、生產(chǎn)工藝、人員等因素，會(huì)存在非無(wú)菌藥品中微生物或者微生物的代謝產(chǎn)物含量超標(biāo)，而引起藥品的污染、變質(zhì)。通常，這些微生物包括細(xì)菌、霉菌、酵母菌，其中大量是與致病菌和產(chǎn)毒菌有關(guān)的菌屬，如大腸桿菌、沙門(mén)菌、葡萄球菌、青霉、黃曲霉等。
由于原輔料、生產(chǎn)工藝不同，不同類(lèi)型的藥品會(huì)被不同種類(lèi)的微生物所污染。微生物種類(lèi)越多，藥品變質(zhì)、失效的可能性越大，最終會(huì)對(duì)人體造成感染、發(fā)熱、過(guò)敏、中毒等危害。非無(wú)菌藥品微生物限度檢查，是對(duì)非滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度的一種檢查方法。對(duì)藥品中微生物限度的檢查，是評(píng)價(jià)生產(chǎn)企業(yè)的藥用原料、輔料、設(shè)備、器具、工藝流程、生產(chǎn)環(huán)境和操作者衛(wèi)生狀況的重要手段和依據(jù)，也是控制和提高藥品質(zhì)量、保證人民群眾安全用藥的一項(xiàng)重要舉措。目前，藥品微生物限度的檢查包括：中成藥類(lèi)、化學(xué)藥品類(lèi)、生化藥品類(lèi)的非規(guī)定滅菌制劑，藥用原料及輔料，中藥提取物及中藥飲片。
為了保證檢測(cè)結(jié)果的真實(shí)、準(zhǔn)確，在非無(wú)菌藥品微生物限度的檢查過(guò)程中，應(yīng)注意以下四個(gè)方面的影響：（1）被污染藥品中微生物的特殊性；（2）藥品原污染狀態(tài)的保持；（3）藥品微生物限度檢查方法的適用性試驗(yàn)；（4）檢驗(yàn)人員素養(yǎng)的強(qiáng)化。
一、被污染藥品中微生物的特殊性
1、菌體易變性
藥品中菌體細(xì)胞的生長(zhǎng)易受到外界環(huán)境的干擾，菌體細(xì)胞在藥品中處于不穩(wěn)定狀態(tài)，它可隨存放時(shí)間的延長(zhǎng)而死亡，也可在適宜條件下增殖。因此，在適宜的標(biāo)準(zhǔn)化條件下，一定時(shí)間內(nèi)藥品的污染量才會(huì)處于動(dòng)態(tài)平衡，才可以評(píng)估總體污染的狀況。
2、分布不均勻性
除在生產(chǎn)前期的污染外，其它環(huán)節(jié)所造成的微生物污染都是局部的。因此，同批次產(chǎn)品中不同包裝內(nèi)的污染狀態(tài)就會(huì)有差異，采取合理的抽樣方法才能保證檢驗(yàn)結(jié)果的代表性、準(zhǔn)確性。
3、菌體易受損
由于微生物受到原料處理、加工等操作程序的影響，或者藥品本身對(duì)微生物的抑殺作用，會(huì)使多數(shù)微生物處于受損壞狀態(tài)。這些受到損壞的微生物用一般的方法檢查，往往會(huì)出現(xiàn)假陰性或計(jì)數(shù)偏低的結(jié)果。
4、受干擾因素復(fù)雜
因?yàn)槲廴揪膩?lái)源多、種類(lèi)多，而且藥品種類(lèi)多、劑型成分復(fù)雜，所以在不同的藥劑中，測(cè)定同一種菌往往會(huì)得到不同的結(jié)果。
二、藥品原污染狀態(tài)的保持
檢驗(yàn)過(guò)程中保持檢驗(yàn)藥品的原污染狀態(tài)，可使檢驗(yàn)結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠。因而在檢驗(yàn)過(guò)程中必須嚴(yán)格規(guī)范操作，以免藥品二次污染，導(dǎo)致菌細(xì)胞再繁殖或死亡。
1、檢驗(yàn)環(huán)境的影響
微生物限度檢查應(yīng)有單獨(dú)的潔凈實(shí)驗(yàn)室，潔凈實(shí)驗(yàn)室應(yīng)放在二層樓以上，遠(yuǎn)離污染源。每個(gè)潔凈實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有獨(dú)立的凈化空氣系統(tǒng)，其環(huán)境潔凈度不應(yīng)低于10000級(jí)，局部潔凈度為100級(jí)。室內(nèi)的溫度應(yīng)控制在l8～26oC， 相對(duì)濕度應(yīng)控制在40%～60%。每次操作前后都要用0.1%苯扎溴銨溶液或其他適宜消毒液， 擦拭操作臺(tái)及可能污染的死角，然后啟動(dòng)層流凈化裝置。緩沖間內(nèi)應(yīng)有洗手盆及無(wú)菌的實(shí)驗(yàn)服、帽、口罩、鞋套。操作臺(tái)應(yīng)備有天平、酒精燈、火柴、酒精棉球、助吸器等設(shè)備。
檢驗(yàn)用陽(yáng)性菌操作應(yīng)在獨(dú)立的陽(yáng)性菌實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行， 不得與供試品檢驗(yàn)共用同一個(gè)潔凈實(shí)驗(yàn)室，避免交叉污染。
2、檢驗(yàn)材料及用具的影響
用作酒精棉球的脫脂棉應(yīng)在高壓滅菌后再加入75%的酒精使用。培養(yǎng)基在使用前需做培養(yǎng)基適用性檢查，且培養(yǎng)基和稀釋液每次根據(jù)樣品數(shù)量的多少配制。未使用完的新配培養(yǎng)基應(yīng)在2～8oC避光冷藏條件下保存， 一般固體培養(yǎng)基保存不超過(guò)兩周，液體培養(yǎng)基保存不超過(guò)四周，部分鑒定培養(yǎng)基保存不超過(guò)60d。培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后應(yīng)進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)，以保證培養(yǎng)基的無(wú)菌度。
操作過(guò)程中所用的器皿均應(yīng)洗滌干凈后用牛皮紙包扎嚴(yán)密滅菌。經(jīng)高壓蒸汽滅菌的物品取出時(shí)切勿立即置于冷處，避免因急速冷卻，使滅菌物品內(nèi)蒸汽冷凝造成負(fù)壓易染菌，取出后應(yīng)放置在恒溫培養(yǎng)箱中烘干，待用。
各種恒溫恒濕培養(yǎng)箱除定期檢定外，還應(yīng)每天觀察箱內(nèi)溫度及濕度波動(dòng)的范圍。高壓蒸氣滅菌器在每次使用時(shí)，應(yīng)放入指示膠帶或指示卡，利用其變色情況，判斷是否在設(shè)定的溫度與壓力條件下達(dá)到滅菌效果。此外，對(duì)各種器械及設(shè)備均應(yīng)有定期計(jì)量與檢定記錄，以保證正常使用。
三、藥品微生物限度檢查方法的適用性試驗(yàn)
在藥品微生物限度檢查前，需對(duì)其檢查方法的適用性進(jìn)行驗(yàn)證。根據(jù)《中國(guó)藥典》2015年版四部通則非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查方法（通1105、通則1106）的要求，需對(duì)微生物計(jì)數(shù)方法適用性、控制菌檢查法適用性進(jìn)行驗(yàn)證。
1、微生物計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)
目前,平皿傾注法、薄膜過(guò)濾法及最可能數(shù)法是藥品微生物計(jì)數(shù)的常用方法。平皿傾注法適用于抑菌作用弱或無(wú)抑菌功效的藥品，是試驗(yàn)中最常用的方法，也是方法適用性試驗(yàn)的首選；薄膜過(guò)濾法適用于抑菌作用較強(qiáng)的藥品；最可能數(shù)法因其精確度和準(zhǔn)確度不及薄膜過(guò)濾法和平皿傾注法，更適用于某些受微生物污染量很小的供試品。在供試品的檢查中，需要基于供試品的物理化學(xué)特性和微生物的限度標(biāo)準(zhǔn)，挑選操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確度高的方法，且應(yīng)考慮供試品的抑菌性。另外，在培養(yǎng)基（或稀釋液）滅菌前加入中和劑、滅活劑或表面活性劑，可用來(lái)消除干擾物抑菌的作用，避免損傷污染供試品的微生物。以上方法選擇后，應(yīng)對(duì)所選方法的適用性進(jìn)行確認(rèn)。
2、控制菌檢查法適用性試驗(yàn)
控制菌檢查法是在特定的環(huán)境下，對(duì)供試品中是否含有規(guī)定的致病性微生物進(jìn)行檢測(cè)。《中國(guó)藥典》規(guī)定檢查的控制菌有：耐膽鹽革蘭陰性菌、大腸埃希菌、沙門(mén)菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、梭菌、白色念珠菌。在常規(guī)法中，需在培養(yǎng)基中加入確定量的供試液和陽(yáng)性試驗(yàn)菌（數(shù)量不大于100cfu）。對(duì)抑菌作用較強(qiáng)的藥品，應(yīng)采用薄膜過(guò)濾法。在具體的操作中，在集菌培養(yǎng)器中先過(guò)濾供試液，再利用沖洗液沖洗。在沖洗完畢后，向集菌培養(yǎng)器中加入陽(yáng)性試驗(yàn)菌和規(guī)定的培養(yǎng)基。之后，在規(guī)定條件下進(jìn)行微生物的培養(yǎng)和結(jié)果的判定。另外，應(yīng)以稀釋液替代供試液，按照前述方法同步進(jìn)行陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
四、檢驗(yàn)人員素養(yǎng)的強(qiáng)化
檢驗(yàn)人員在藥品檢驗(yàn)的過(guò)程中應(yīng)始終牢記無(wú)菌觀念。每次實(shí)驗(yàn)前，應(yīng)對(duì)穿著的無(wú)菌服裝進(jìn)行高壓滅菌處理，對(duì)工作環(huán)境使用紫外線照射30min，并使用消毒液擦拭超凈工作臺(tái)面。在操作完畢后，應(yīng)對(duì)工作環(huán)境進(jìn)行上述消毒、滅菌處理。
綜上，藥品微生物限度檢查工作是一項(xiàng)涉及知識(shí)面廣，技術(shù)性高，影響因素多的工作。檢查結(jié)果能否反映藥品受微生物污染程度的真實(shí)性，除了本文所提到的諸多因素外，操作人員還必須掌握一定的微生物基本知識(shí)和熟練的無(wú)菌操作技術(shù)，嚴(yán)格按照《中國(guó)藥典》2015年版四部中非無(wú)菌藥品微生物限度檢查法的規(guī)定進(jìn)行操作，才能最大限度地保證檢驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)和準(zhǔn)確，保障人民群眾的安全用藥。