G1期(firstgap):從有絲分裂到DNA復(fù)制前的一段時期,又稱合成前期,此期主要合成RNA和核糖體。該期特點是物質(zhì)代謝活躍,迅速合成RNA和蛋白質(zhì),細胞體積顯著增大。這一期的主要意義在于為下階段S期的DNA復(fù)制作好物質(zhì)和能量的準(zhǔn)備。
S期(synthesis):即DNA合成期,在此期,除了合成DNA外,同時還要合成組蛋白。DNA復(fù)制所需要的酶都在這一時期合成。
G2期(secondgap)期為DNA合成后期,是有絲分裂的準(zhǔn)備期。在這一時期,DNA合成終止,大量合成RNA及蛋白質(zhì),包括微管蛋白和促成熟因子等。
M期:細胞分裂期。
細胞的生命是一個持續(xù)更新、持續(xù)從頭開始的過程。從它的母細胞分裂開始,到它的子細胞形成或細胞自身死亡結(jié)束。而細胞周期(cellcycle)就是指從一次細胞分裂形成子細胞開始,到下一次細胞分裂形成子細胞為止所經(jīng)歷的過程。其中,細胞在這種前期、生長、DNA復(fù)制和分裂等階段間循環(huán)會依次經(jīng)歷G1期、S期、G2期和M期。
一直以來,區(qū)分細胞這4個階段并非易事,因為要同時對來自許多不同報告蛋白(作為報告基因的蛋白)的信號進行成像,在技術(shù)上是非常困難的,先前的系統(tǒng)只能簡單區(qū)分4個階段中的3個。其中S期到G2期一直是科學(xué)家觀察4個細胞周期的“盲區(qū)”。
fucci4,用于可視化的細胞4周期的報告系統(tǒng)
為了克服這一限制,美國斯坦福大學(xué)研究人員MichaelZLin團隊開發(fā)了一種名為mMaroon1的熒光蛋白,其熒光位于可見光譜遠紅端,能同時與青綠、綠色和橙色熒光蛋白成像。
研究團隊使用這種遠紅報告蛋白來標(biāo)記一種標(biāo)志著S期(DNA復(fù)制)到G2期(細胞生長)過渡期的蛋白,從而區(qū)分出了細胞周期的所有階段。
這項實驗主要包括:細胞克??;誘變與文庫篩選;結(jié)構(gòu)建模;熒光蛋白表征;細胞培養(yǎng)和病毒生產(chǎn);哺乳動物細胞中Maroon亮度變化對比;融合蛋白的成像;四色成像;SLBP成像和PCNA時間制;細胞周期分布分析;統(tǒng)計分析以及對fucci4系統(tǒng)進行快照和延時成像。
在這個試驗中,熒光蛋白mMaroon1起到了關(guān)鍵作用,它奇異般地“點亮”生物分子或細胞,顯示出生物分子的活動情況,進一步幫助我們理解這些分子或細胞的活動規(guī)律和本質(zhì)。
透過這一技術(shù),科學(xué)家或能改進對細胞周期及其調(diào)控的表征,開發(fā)出針對腫瘤細胞的新型治療手段。