細(xì)菌、酵母、真菌、霉菌、放線菌常用培養(yǎng)基匯總！
小楊 / 2024-02-19 08:54:01
百歐博偉生物：自然界的微生物由于種類不同，它們對營養(yǎng)的需求也有差別，因此在菌種分離、保藏以及工業(yè)發(fā)酵中，都要根據(jù)該菌株對營養(yǎng)需求的特點(diǎn)來配制相應(yīng)的培養(yǎng)基。
在科研生產(chǎn)上按所用原料不同，又可分兩類：應(yīng)用肉湯、馬鈴薯汁等天然成分配制的，稱為天然培養(yǎng)基；應(yīng)用化學(xué)藥品配成并標(biāo)明成分的，稱為合成培養(yǎng)基或綜合培養(yǎng)基。含化學(xué)試劑的培養(yǎng)基，大多為合成培養(yǎng)基。由于液體培養(yǎng)基不適合長期保留，現(xiàn)已有公司改制成粉末。培養(yǎng)基在受熱、吸潮后，易被細(xì)菌污染或分解變質(zhì)，因此保管時(shí)必須防潮、避光，置低溫處保存。對一些需嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基(如組織培養(yǎng)基)，較長時(shí)間的儲(chǔ)存必須放在2~6℃的冰箱內(nèi)。常見培養(yǎng)基有以下一些。
一、細(xì)菌培養(yǎng)基
配方一：牛肉膏瓊脂培養(yǎng)基
牛肉膏0.03g，蛋白胨1.0g，氯化鈉0.05g，瓊脂1.5g，水100ml。在燒杯內(nèi)加水100ml，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化鈉，置火上加熱，待各組分溶解后，加人瓊脂，不斷攪拌以免粘底。待瓊脂完全溶解后補(bǔ)足失水，用10%鹽酸或10%的氫氧化鈉調(diào)整pH為7.2~7.6，分裝各試管，加塞，用高壓蒸汽滅菌30 min備用。
配方二：肉湯培養(yǎng)基
取新鮮牛心(除去脂肪和血管)250g，用刀剁成肉末，加人500ml蒸餾水和5g蛋白胨。煮沸，轉(zhuǎn)文火燉2h，過濾，濾出的肉末干燥處理，濾液調(diào)pH為7.5左右。每支試管內(nèi)加人10ml。肉湯和少量碎肉末，滅菌，備用。
配方三：根瘤菌培養(yǎng)基
葡萄糖10g，磷酸氫二鉀0.05g，碳酸鈣3g，硫酸鎂0.02g酵母粉0.04 g，瓊脂20g，水1000ml，1%結(jié)晶紫溶液1mL。先把瓊脂加水煮沸溶解，再分別加入其他組分，攪拌溶解后，分裝，滅菌，備用。
配方四：LB培養(yǎng)基
LB培養(yǎng)基的配方如下：胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L，酵母提取物(Yeast extract) 5g/L，氯化鈉(NaCl) 10g/L，
另外根據(jù)經(jīng)驗(yàn)值用NaOH調(diào)節(jié)該培養(yǎng)基的pH，使其達(dá)到7.4(該pH適合使用最廣的原核表達(dá)菌種E.coli的生長)。
二、放線菌培養(yǎng)基
配方一：淀粉瓊脂培養(yǎng)基(高氏培養(yǎng)基)
可溶性淀粉2g，硝酸鉀0.1g，磷酸氫二鉀0.05g，氯化鈉0. 05g，硫酸鎂0.05g，硫酸亞鐵0.001g，瓊脂2g，水100 mL。先把淀粉用5ml水調(diào)成糊狀后，倒入95mL水，攪勻后加入其他藥品，使其溶解。煮沸時(shí)加入瓊脂，不停攪拌，待瓊脂完全溶解后，補(bǔ)足失水。調(diào)整pH為7.2~7.4，分裝后滅菌，備用。
配方二：面粉瓊脂培養(yǎng)基
面粉60g，瓊脂20g，水1000mL。用水將面粉調(diào)成糊狀，加水到500mL，文火煮30min。另取500mL水，放入瓊脂，加熱煮沸到溶解，把兩液調(diào)勻，補(bǔ)充水分，調(diào)整pH到7.4，分裝，滅菌，備用。
三、真菌培養(yǎng)基
配方一：薩氏(Sabouraud's)培養(yǎng)基
蛋白胨10g，瓊脂20g，麥芽糖40g，水1000mL。先把蛋白胨、瓊脂加水后，加熱，不斷攪拌，待瓊脂溶解后，加入40g麥芽糖(或葡萄糖)，攪拌，溶解后分裝，滅菌，備用。本培養(yǎng)基可培養(yǎng)許多種類真菌。
配方二：馬鈴薯糖瓊脂培養(yǎng)基
取200g切成小塊，加水1000ml，煮沸30 min后，補(bǔ)足水分。在濾液中加入10g瓊脂，煮沸溶解后加糖20g(用于培養(yǎng)霉菌的加入蔗糖，用于培養(yǎng)酵母菌的加入葡萄糖)，補(bǔ)足水分，分裝，滅菌，備用。將該培養(yǎng)基的pH調(diào)為7.2~7.4，配方中的糖，如用葡萄糖還可用來培養(yǎng)放線菌和芽孢桿菌。
配方三：豆芽汁培養(yǎng)基
黃豆芽100g，瓊脂15g，葡萄糖20g，水1000mL。洗凈黃豆芽，加水煮沸30min，用紗布過濾，濾液中加入瓊脂，加熱溶解后放入糖，攪拌溶解，補(bǔ)足水分到1000 mL，分裝，滅菌，備用。將該培養(yǎng)基的pH調(diào)為7.2~7.4，可用來培養(yǎng)細(xì)菌和放線菌。配方四：豌豆瓊脂培養(yǎng)基豌豆80粒，瓊脂5g，水200 mL。取80粒干豌豆加水適量，煮沸1h，紗布過濾，在濾液中加入瓊脂，煮沸溶解，分裝，滅菌，備用。
四、酵母培養(yǎng)基
1、基礎(chǔ)培養(yǎng)基
YPD 或YEPD：Yeast Extract Peptone Dextrose Medium(1L)，又叫酵母浸出粉胨葡萄糖培養(yǎng)基，加入瓊脂的又叫酵母膏胨葡萄糖（YPD）瓊脂培養(yǎng)基
配方：1% Yeast Extract（酵母膏），2% Peptone（蛋白胨），2% Dextrose (glucose)葡萄糖，（若制固體培養(yǎng)基，加入2%瓊脂粉）
配制方法：
（1）溶解10gYeast Extract（酵母膏），20gPeptone（蛋白胨）于900ml水中，如制平板加入20g瓊脂粉
（2）加入20g Dextrose (glucose)（葡萄糖）
（3）高壓 115 度 15min
注：葡萄糖，yeast extract ，peptone溶液混合后在高溫下可能會(huì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致培養(yǎng)基成分變化，所以要分別滅菌后再混合。葡萄糖可以過濾除菌，也可以115℃ 15min滅菌，(葡萄糖溶液滅菌后加入)。
2、基本培養(yǎng)基
配方一：NaAc 10g， (NH)2SO4 5g， NaHPO4 0.05g， MgSO4-7H2O 1g，維生素B 100ug，蒸餾水100mL，處理瓊脂2g ，pH自然，121℃滅菌15min；
配方二：葡萄糖2%， KHPO4 0.0 1%， MgSO4 · 7H2O 0.05%，(NH)2S04，0.05% ，處理瓊脂2%。蒸餾水配制，pH 6.0，121℃滅菌15min；
配方三：葡萄糖10g， NaCl 0.01g， (NH)2SO4 1g，微量元素母液1mL， K2HPO4 0.0125g，維生素母液1mL， KI 0.0001g， MgSO4·7H2O 0.05g， CaCl·2H2O 0.01g，蒸餾水1000mL。 pH 5.5~6.0，115℃滅菌25min；
微量元素母液：HPO4 1mL，ZnSO4·7H2O 7mg，CuSO4-5H2O 1mg， CaCl2-6H2O 5mg，蒸餾水 100mL。
維生素母液：煙堿酸 40mg，肌醇 200mg，泛酸 20mg，對氨基苯甲酸 20mg，核黃素 20mg，維生素B 40mg，生物素 0.02mg，吡哆醇 40mg，蒸餾水 100mL。
3、YNB培養(yǎng)基
YNB培養(yǎng)基由以下A、B、C三種溶液組成:
A液，維生素混合液：維生素B 1000mg，煙酸 400mg，吡哆醇 400mg，生物素 20mg，泛酸鈣 2000mg，核黃素 200mg，肌醇 10000mg，對氨基苯甲酸 200mg，無離子水 1000mL；
B液，微量元素液：HBO4 500mL，MnSO4 ·7H2O 200mg，ZnSO4-7H2O 400mg， CuSO4-7H2O 40mg， FeCls•6H2O 100mg，Na2MnO3 200mg，無離子水 1000mL。
C液，其它無機(jī)鹽液：KI 0.01mg，CaCl2-2H2O 0.01g，K2HPO4 0.015g，KH2PO4 0.085g，MgSO4·7H2O 0.05g，NaCl 0.01g，無離子水1000ml。
配制方法：取A液1mL、B液1mL、C液10mL、無離子水1000mL，混合，調(diào)pH為6.5，即成。說明：①配制YNB時(shí)，先分別將已滅菌分裝的A、B液各1mL與C液10mL，在無菌條件下混合，再將已滅菌的(NH4)2SO4按0.05%的量加人到無離子水中，混勻即可。
注：配制糖發(fā)酵培養(yǎng)基時(shí)，方法同上，只是按2%濃度加入不同的糖液。
五、食用菌菌種培養(yǎng)基
配方一：馬鈴薯-蔗糖-瓊脂培養(yǎng)基
20%馬鈴薯煮汁1000 mL，蔗糖20 g，瓊脂18 g。馬鈴薯洗凈去皮后，切成小塊。稱取小塊200 g，加水1000 mL，煮沸20min后，過濾。 在濾汁中補(bǔ)足水分到1000 mL，即成20%馬鈴薯煮汁。在汁中加入瓊脂和蔗糖，煮沸，溶解后，補(bǔ)足水分，分裝，滅菌，備用。pH要求不嚴(yán)，可以不測定。
配方二：綜合馬鈴薯培養(yǎng)基
20%馬鈴薯煮汁1000 mL，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂1.5 g，葡萄糖20 g，維生素10 mg，1脂18g。先配制20%馬鈴薯煮汁，方法同上。在煮汁中加入上述各種組分，加熱溶解后補(bǔ)足水分，調(diào)整pH到6，分裝，滅菌，備用。該培養(yǎng)基用于培養(yǎng)和保存靈芝、平菇、香菇等食用菌菌種。
六、藍(lán)藻培養(yǎng)基
BG-11培養(yǎng)基
母液1: NaNO3，300mg/mL，NaCO3，4mg/mL；
母液2: MgSO4·7H2O 15mg/mL；
母液3: CaCl2·2H2O；
母液4:檸檬酸(CA) 1.2mg/mL，F(xiàn)eCA 1.5mg/mL，Na2EDTA 0.08mg/mL；
母液5: KHPO4 ·3H2O 8mg/mL:
母液6: HBO3 2.86mg/mL，MnCl-4H2O 1.81mg/mL，ZnSO4·7H2O 0.0222mg/mL ，NaMoO4·2H2O 0.03mg/mL，CusO4-5H2O 0.079mg/mL，Co(NO3)2·6H2O 0.0494mg/ml。
取母液1、2、3、4、5各5mL，取母液6 1mL，加蒸餾水至1000mL，調(diào)pH值為8。0.0 BG-11固體培養(yǎng)基含瓊脂1% 。
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