抗生素對(duì)微生物生長(zhǎng)的最低抑制濃度的測(cè)定方法！
小楊 / 2024-03-19 08:44:42
一、實(shí)驗(yàn)原理
很多化學(xué)藥劑都可以抑制微生物的生長(zhǎng)。最低抑制濃度（minimal inhibition concentration, MIC）是指藥物抑制微生物生長(zhǎng)的最低濃度。由于微生物對(duì)藥物的耐受性不同，因此，最低抑制濃度是有差異的。可以采用固體或液體培養(yǎng)的方式進(jìn)行測(cè)定，通過制備含有不同濃度的抗生素平板，將供試菌株接種，然后將平板置適宜溫度下培養(yǎng)一定時(shí)間，觀察菌株生長(zhǎng)情況。
判斷MIC 可以供試菌株不生長(zhǎng)的平板所含的藥劑濃度，也可以按重復(fù)接種點(diǎn)長(zhǎng)出的菌落數(shù)少于5 個(gè)者作為MIC 標(biāo)準(zhǔn)。固體平板法的優(yōu)點(diǎn)是在一個(gè)平板上可同時(shí)點(diǎn)接多個(gè)菌株。值得注意的是，當(dāng)加入藥劑后，需要立即充分搖勻后再制備平板，否則藥劑分散不均勻，會(huì)影響結(jié)果。
另一種方法是液體稀釋法，將一定培養(yǎng)液中加入不同濃度的藥劑，配置成一定濃度梯度，再將制備好的菌懸液按一定體積接種，置一定溫度培養(yǎng)后，可通過肉眼或分光光度計(jì)測(cè)定濁度，以不能生長(zhǎng)菌株的試管內(nèi)藥劑的濃度為MIC, 藥劑的濃度以μ（單位）/ml 或μg/ml 表示。
本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)液體法檢測(cè)鏈霉素對(duì)細(xì)菌的最低抑制濃度。
二、實(shí)驗(yàn)材料
2、培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（液體）
3、藥劑：鏈霉素：1000 μ（單位）/ml (過濾滅菌)
4、器皿：無(wú)菌培養(yǎng)皿，無(wú)菌移液管（1ml, 5ml），無(wú)菌試管，無(wú)菌水，分光光度計(jì)
三、實(shí)驗(yàn)方法
1、取活化好的菌種斜面，分別挑取一環(huán)接種于液體培養(yǎng)基中，在37℃下培養(yǎng)6-8 小時(shí)，作為測(cè)試菌液。
2、按下表配置不同鏈霉素濃度的培養(yǎng)基（每個(gè)試管3 個(gè)重復(fù)）：
3、分別取0.2ml 菌液加入上述試管中，充分混勻，另做兩個(gè)對(duì)照，即：只含菌和只含藥劑
4、將試管置37℃溫箱培養(yǎng)12-24 小時(shí)，取出試管，充分振蕩，用肉眼觀察每個(gè)試管濁度，也可用分光光度計(jì)檢測(cè)濁度。
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
注意：
1、注意菌齡適宜，接種量一致，避免人為因素干擾結(jié)果；
2、加入藥物立即混勻后再接入菌種。
3、每個(gè)處理應(yīng)設(shè)3 個(gè)重復(fù)。
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