亚日韩在线中文字幕亚洲,国产在线播放鲁啊鲁视频,张柏芝手扒性器全部图片,亚洲成无码电影在线观看

 

NCI-H146人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系是一種常見的實驗細(xì)胞系，被廣泛應(yīng)用于腫瘤研究，包括小細(xì)胞肺癌的研究。這種細(xì)胞系具有生長速度快、分裂旺盛、對癌基因突變易感等特點，因此被廣泛用于腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移等方面的研究。

 

NCI-H146人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系的遺傳背景比較清楚，具有多個基因突變，包括TP53、RB1等重要腫瘤抑制基因的突變。這種細(xì)胞系還具有某些與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因表達(dá)上調(diào)或下調(diào)的特點，因此被廣泛用于探討腫瘤轉(zhuǎn)移的機制和尋找抗腫瘤藥物的研究。

 

NCI-H146人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系是一種常用的肺癌細(xì)胞系，用于研究小細(xì)胞肺癌的發(fā)生、發(fā)展和治療。該細(xì)胞系來源于一名患有小細(xì)胞肺癌的患者，經(jīng)過多次傳代和篩選，形成了具有貼壁生長特性的細(xì)胞株。

 

 

貼壁生長特性：該細(xì)胞系能夠在含有血清的培養(yǎng)基中貼壁生長，形成單層或多層細(xì)胞。

 

高增殖率：該細(xì)胞系具有較高的增殖率，可以在短時間內(nèi)獲得大量的細(xì)胞。

 

多藥耐藥性：該細(xì)胞系具有多藥耐藥性，即對多種化療藥物具有抗性。

 

 

1)復(fù)蘇NCI-H146人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。

 

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

 

2)NCI-H146人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

 

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

 

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

 

c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

 

d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

 

3)NCI-H146人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

 

 

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。

 

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。

 

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 

 

 

探討HOTTIP作為ceRNA誘導(dǎo)EMT參與小細(xì)胞肺癌發(fā)生發(fā)展及耐藥機制的調(diào)節(jié)。通過本項目研究,進(jìn)一步豐富小細(xì)胞肺癌發(fā)生及耐藥的分子機制,為篩選小細(xì)胞肺癌耐藥及預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志物提供理論依據(jù)。

 

1、非編碼RNA芯片課題組利用Arraystar公司的人類lncRNA芯片技術(shù)分析小細(xì)胞肺癌多藥耐藥細(xì)胞株(H69AR)、NCI-H146人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系與化療敏感細(xì)胞株(H69)的lncRNA差異表達(dá)譜,并結(jié)合前期通過北京博奧生物芯片有限公司的miRNA芯片差異表達(dá)譜的結(jié)果,利用生物信息學(xué)技術(shù)尋找與小細(xì)胞肺癌耐藥可能相關(guān)的非編碼RNA分子。

 

2、臨床樣本收集2008年1月至2015年1月在南方醫(yī)科大學(xué)附屬順德第一人民醫(yī)院接受治療的115例小細(xì)胞肺癌石蠟包埋組織,標(biāo)本來自活檢組織及纖維支氣管鏡檢查穿刺組織,經(jīng)病理診斷為小細(xì)胞肺癌。本研究經(jīng)南方醫(yī)科大學(xué)附屬順德第一人民醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn),所有患者均簽署知情同意書。

 

3、細(xì)胞培養(yǎng)人小細(xì)胞肺癌化療敏感細(xì)胞株NCI-H69、NCI-H446、NCI-H146人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系和多藥耐藥細(xì)胞株NCI-H69AR均購自美國ATCC;另一多藥耐藥細(xì)胞株H446DDP細(xì)胞為本課題組根據(jù)文獻(xiàn)報道(PMID:2436751)的NCI-H69AR細(xì)胞的建立方法構(gòu)建;16HBE為人支氣管上皮細(xì)胞株。

 

4、細(xì)胞轉(zhuǎn)染(1)瞬時轉(zhuǎn)染:采用陽離子脂質(zhì)體法,將miR-574-5p mimics(模擬物)、inhibitors(抑制物)或antagomir(拮抗劑,更穩(wěn)定,可用于動物實驗)及其陰性對照(miR-NC)序列,和HOTTIP、HOXA11、HOXA13、EZH1的小干擾RNA序列和pcDNA3.1/PEX-3表達(dá)載體及相應(yīng)的陰性對照載體,分別轉(zhuǎn)染5株小細(xì)胞肺癌細(xì)胞和1株人支氣管上皮細(xì)胞,獲得瞬時上下調(diào)miR-574-5p、HOTTIP、H0XA11、HOXA13、EZH1的細(xì)胞。操作按LipofectamineTM2000試劑說明書進(jìn)行。(2)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染:①采用陽離子脂質(zhì)體法,將表達(dá)HOTTIP的pcDNA3.1載體及相應(yīng)的空載體、表達(dá)HOXA11、HOXA13的PEX-3載體及PEX-2空載體(綠色熒光標(biāo)記)分別轉(zhuǎn)染H69和H446細(xì)胞,通過G418篩選陽性轉(zhuǎn)染子進(jìn)行擴大培養(yǎng),獲得穩(wěn)定高表達(dá)HOTTIP、HOXA11、HOXA13的H69、NCI-H146人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系和H446細(xì)胞株。操作按LipofectamineTM2000試劑說明書進(jìn)行。②采用慢病毒法,將HOTTIP的siRNA干擾序列通過LV3慢病毒載體包裝后進(jìn)行靶細(xì)胞侵染實驗,同時設(shè)立LV3-NC對照轉(zhuǎn)染組,獲得穩(wěn)定沉默HOTTIP的H146、H69AR及H446DDP細(xì)胞株。

 

北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司的微生物菌種查詢網(wǎng)提供微生物菌種保藏、測序、購買等服務(wù),是中國微生物菌種保藏中心的服務(wù)平臺，并且是集微生物菌種、菌種,ATCC菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基為一體的大型微生物查詢類網(wǎng)站，自設(shè)設(shè)備及技術(shù)的微生物菌種保藏中心！歡迎廣大客戶來詢！