小鼠膀胱成纖維細(xì)胞提取物的知識(shí)背景與應(yīng)用研究！
小楊 / 2024-06-14 09:02:17
一、背景
小鼠膀胱成纖維細(xì)胞提取物分離自
小鼠膀胱成纖維細(xì)胞，小鼠膀胱成纖維細(xì)胞分離自膀胱組織；膀胱是一個(gè)儲(chǔ)尿器官，在哺乳類動(dòng)物，它是由平滑肌組成的一個(gè)囊形結(jié)構(gòu)，位于骨盆內(nèi)，其后端開口與尿道相通。膀胱與尿道的交界處有括約肌，可以控制尿液的排出。膀胱壁由三層組織組成，由內(nèi)向外為黏膜層、肌層和外膜。
肌層由平滑肌纖維構(gòu)成，稱為逼尿肌，逼尿肌收縮，可使膀胱內(nèi)壓升高，壓迫尿液由尿道排出。在膀胱與尿道交界處有較厚的環(huán)形肌，形成尿道內(nèi)括約肌。在括約肌收縮能關(guān)閉尿道內(nèi)口，防止尿液自膀胱漏出。膀胱壁分為三層：即漿膜層（蜂窩脂肪組織）、肌肉層（逼尿肌、膀胱三角區(qū)肌）和黏膜層（極薄的一層移行上皮組織）。
成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的膀胱成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。
30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng)，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。膀胱成纖維細(xì)胞分泌的生長(zhǎng)因子是一種具有多功能的促有絲分裂原，研究已表明其參與惡性腫瘤的形成過程。近年來，堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子在膀胱癌發(fā)病過程中的作用、與生物學(xué)行為之間的關(guān)系以及治療上的應(yīng)用已受到重視。
二、應(yīng)用
通過對(duì)大鼠膀胱出口梗阻導(dǎo)致的膀胱纖維化模型進(jìn)行研究,初步探討腺苷通路在膀胱逼尿肌纖維化過程中的作用機(jī)制。方法：體重約150g的健康wistar大鼠24只,隨機(jī)分為4組每組6只：空白對(duì)照組、假手術(shù)組、膀胱纖維化組、膀胱纖維化+茶堿干預(yù)組。假手術(shù)組僅做下腹部正中切口及分離膀胱頸部,不行膀胱出口結(jié)扎。
茶堿干預(yù)的開始時(shí)間為手術(shù)后天(劑量為10mg/kg/d),干預(yù)時(shí)間為6周。用免疫組織化學(xué)法和實(shí)時(shí)熒光定量(Real-Time PCR)的方法檢測(cè)膀胱組織中纖維化相關(guān)指標(biāo)：Ⅰ型膠原、Ⅲ型前膠原、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)以及與腺苷代謝密切相關(guān)的胞外-5’-核苷酸酶(CD-73)的表達(dá)以及變化,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,觀察各組之間表達(dá)的差異。
結(jié)果：空白對(duì)照組和假手術(shù)組Ⅰ型膠原、Ⅲ型前膠原、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)、胞外-5’-核苷酸酶(CD-73)的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與空白對(duì)照組相比膀胱出口梗阻組的Ⅰ型膠原、Ⅲ型前膠原、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)表達(dá)上調(diào)、胞外-5’-核苷酸酶(CD-73)的表達(dá)下降并且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與膀胱出口梗阻組相比茶堿干預(yù)組的Ⅰ型膠原、Ⅲ型前膠原、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)表達(dá)下調(diào)、胞外-5’-核苷酸酶(CD-73)的表達(dá)上升差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
結(jié)論：
1、膀胱出口梗阻后膀胱組織中TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ的表達(dá)增加,CD-73表達(dá)下調(diào)。
2、腺苷受體阻斷劑茶堿可以抑制膀胱出口梗阻后導(dǎo)致的TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ的表達(dá)。
3、CD-73mRNA的表達(dá)下調(diào)可能和腺苷的反饋調(diào)節(jié)機(jī)制有關(guān)。
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