標(biāo)準(zhǔn)豚鼠血清碳吸附過(guò)濾的功能與應(yīng)用及相關(guān)研究！
小楊 / 2024-06-20 09:29:10
一、背景
標(biāo)準(zhǔn)豚鼠血清(碳吸附過(guò)濾)經(jīng)無(wú)菌采集、批量混合，最終過(guò)3次0．1um過(guò)濾分裝而成在經(jīng)過(guò)生物碳吸附補(bǔ)體等有害物質(zhì)。標(biāo)準(zhǔn)豚鼠血清(碳吸附過(guò)濾)適合于單抗研制、較常規(guī)的原代和傳代細(xì)胞培養(yǎng)、規(guī)模化培養(yǎng)的疫苗生產(chǎn)。
血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。
血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸堿度、滲透壓等作用。它主要由水和各種化學(xué)成分組成,這些化學(xué)成分包括白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白,甘油三酯,總膽固醇,谷丙轉(zhuǎn)氨酶等。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無(wú)機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。
二、標(biāo)準(zhǔn)豚鼠血清(碳吸附過(guò)濾)功能
提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類(lèi)、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來(lái)源。起酸堿度緩沖液作用。提供蛋白酶抑制劑，使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活，保護(hù)細(xì)胞不受傷害。
三、應(yīng)用
用于豚鼠誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞樣細(xì)胞的建立研究：
以慢病毒為載體,以傳統(tǒng)的四因子誘導(dǎo)法(oct4、sox2、klf4和c-myc)對(duì)分離的胎兒豚鼠成纖維細(xì)胞進(jìn)行重編程,以獲得重編程的豚鼠iPS細(xì)胞系,為后續(xù)建立動(dòng)物疾病模型和藥物篩選模型奠定基礎(chǔ)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
1、通過(guò)組織塊貼壁法分別分離得到小鼠胚胎成纖維細(xì)胞和豚鼠胎兒成纖維細(xì)胞,兩種細(xì)胞均可穩(wěn)定傳代。豚鼠胎兒成纖維細(xì)胞在病毒感染和多次傳代后,細(xì)胞周期依舊正常,說(shuō)明其可以作為重編程的靶細(xì)胞。
2、使用四種不同轉(zhuǎn)染試劑：磷酸鈣法、脂質(zhì)體2000、脂質(zhì)體LTX和QuickShuttle-293試劑,通過(guò)三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,比較以上四種試劑對(duì)編碼綠色熒光蛋白(GFP)基因的重組慢病毒載體的包裝效率和對(duì)包裝細(xì)胞的毒性作用,以及包裝獲得的病毒感染豚鼠胎兒成纖維細(xì)胞的能力。
通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù)和MTT法分別檢測(cè)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞活性,最終顯示了QuickShuttle-293轉(zhuǎn)染試劑無(wú)論在慢病毒包裝過(guò)程中的轉(zhuǎn)染效率、細(xì)胞毒性及包裝后病毒的感染效率方面顯示出較好的效果。
3、通過(guò)編碼傳統(tǒng)四因子(oct4、sox2、klf4和c-myc)基因的重組慢病毒感染豚鼠胎兒成纖維細(xì)胞,使之成功重編程為豚鼠iPS細(xì)胞,并比較了3種小分子物質(zhì)(維生素C、丙戊酸鈉、丁酸鈉)對(duì)細(xì)胞重編程的促進(jìn)作用,最終發(fā)現(xiàn)添加維生素C和丙戊酸鈉的培養(yǎng)基對(duì)重編程效率有著明顯提升。
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