小鼠腎小管平滑肌細(xì)胞試劑盒的知識(shí)與應(yīng)用研究！
小楊 / 2024-06-18 09:00:17
一、背景
小鼠腎小管平滑肌細(xì)胞試劑盒適用于分離培養(yǎng)
小鼠腎小管平滑肌細(xì)胞。體系提供了的組織分離條件，分離單個(gè)細(xì)胞的效率是已出版文獻(xiàn)中所報(bào)道的5~6倍。此外，本體系還能保證所分離的細(xì)胞在培養(yǎng)基中具有很高的活性。利用的成纖維抑制體系，可以程度地降低所培養(yǎng)的腎小管平滑肌原代細(xì)胞中成纖維細(xì)胞的含量。
腎小管的生理功能有三方面，物質(zhì)的重吸收和排泌功能,如鈉、鉀、氯、鈣等電解質(zhì),蛋白質(zhì)、氨基酸、葡萄糖的吸收和排泌;尿液的濃縮稀釋;泌氫和尿液酸化。其中，小鼠腎小管平滑肌細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形，無橫紋，細(xì)胞核一個(gè)，呈長(zhǎng)橢圓形或桿狀。
小鼠腎小管平滑肌細(xì)胞傳3-5代仍可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
雖然腎小管平滑肌組織機(jī)械韌性很強(qiáng)，但利用本公司試劑盒中提供的腎小管平滑肌組織分離體系來分離，EDTA/EGTA處理過的薄的腎小管平滑肌組織片能使得腎小管平滑肌細(xì)胞的一些功能特性發(fā)生改變，從而將腎小管平滑肌細(xì)胞分離開來。
二、應(yīng)用
用于胰島素抵抗的慢性腎臟病模型脂肪組織細(xì)胞因子譜分析研究：
利用細(xì)胞因子抗體芯片技術(shù)對(duì)糖尿病和慢性腎臟病誘導(dǎo)的胰島素抵抗（Insulin Resistance,IR）的小鼠模型的脂肪組織進(jìn)行檢測(cè),分析并比較兩種模型的差異細(xì)胞因子,闡述其中的炎癥因子及內(nèi)皮損傷相關(guān)因子在疾病中的作用,以期揭示慢性腎臟病患者胰島素抵抗的發(fā)病機(jī)制。
方法：
1、分別建立慢性腎臟病小鼠模型和糖尿病腎病小鼠模型。通過5/6腎切除手術(shù)建立慢性腎臟病小鼠模型,建模12周后根據(jù)IPGTT和ITT實(shí)驗(yàn),把模型小鼠分為慢性腎臟病不伴胰島素抵抗組（CKD-NIR組）和慢性腎臟病伴胰島素抵抗組（CKDIR組）,檢測(cè)各項(xiàng)生化指標(biāo)及腎病病理,構(gòu)建慢性腎臟病模型。同時(shí)普通飲食喂養(yǎng)db/db小鼠和及對(duì)照組db/c小鼠,7個(gè)月后取材,留取尿液和血液便于生化指標(biāo)檢測(cè),留取各組小鼠腎臟用于高碘酸-希夫反應(yīng)（Periodic Acid-Schiff stain,PAS）染色后觀察動(dòng)物病理變化情況,判定模型是否成功建立。
2、取上述慢性腎臟病和糖尿病腎病模型的附睪脂肪組織,利用細(xì)胞因子抗體芯片進(jìn)行檢測(cè)。將所測(cè)樣本之間代謝物濃度的差異倍數(shù)（Fold Change,FC）>1.2且P值<0.05的細(xì)胞因子定義為差異表達(dá)因子,將差異因子進(jìn)行GO分析,KEGG Pathway分析,分別探究每種模型中差異因子的作用,并比較兩種模型差異因子的異同。
3、建立糖尿病腎病模型:與db/c組相比,db/db組小鼠的病理表現(xiàn)為腎小管間質(zhì)纖維化、腎小球肥大、系膜基質(zhì)細(xì)胞增多、基底膜增厚和足細(xì)胞足突部分融合,同時(shí)還伴有血清胰島素和HOMA-IR升高。2.與CKD-NIR組小鼠相比,在CKDIR組小鼠脂肪組織中發(fā)現(xiàn)30種差異表達(dá)蛋白,主要涉及負(fù)調(diào)節(jié)激素分泌,正調(diào)控T細(xì)胞趨化,正調(diào)控白細(xì)胞趨化,白細(xì)胞粘附或滾動(dòng),負(fù)調(diào)控平滑肌細(xì)胞遷移,刺激肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子等生物過程,參與細(xì)胞因子間互作,JAK-STAT信號(hào)通路,炎癥性腸病,美洲錐蟲病,肺結(jié)核等信號(hào)通路。
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