無菌脫纖維羊全血的制法與主要用途及應(yīng)用研究！
小楊 / 2024-06-26 09:13:44
一、背景
無菌脫纖維羊全血適應(yīng)于血瓊脂平板等培養(yǎng)基的生產(chǎn)、綿羊紅細胞提取、細菌培養(yǎng)、生物醫(yī)學(xué)研究基礎(chǔ)等。無菌脫纖維羊全血是對健康綿羊無菌采血，玻璃珠搖床脫纖維而成，天然新鮮血液，顏色鮮紅，無任何細菌、真菌、支原體、衣原體，不添加任何防腐劑、抗生素。
血平板適于各類細菌的生長，一般細菌檢驗標本的分離，都應(yīng)接種此平板。原料普通瓊脂培養(yǎng)基100ml 脫纖維血液5—10ml 。
二、制法
①以無菌操作采取綿羊、牛、馬或兔血置于滅菌并盛有玻璃珠的三角瓶內(nèi)，邊加血邊不停地搖動玻璃珠直至血纖維分離為止。
②普通瓊脂培養(yǎng)基加熱溶解后，待冷至約55—60度時，以無菌操作按量加入血液，輕輕搖動均勻，不使產(chǎn)生泡沫，隨即分裝于滅菌的平皿或試管中，制成血液瓊脂平板或血液瓊脂斜面。
三、用途
供某些病原菌的分離培養(yǎng)用；觀察細菌的溶血現(xiàn)象，作鑒別用；常規(guī)移植繼代和保存菌種。取營養(yǎng)瓊脂（PH7．6），加熱使其溶解待冷至45-50℃，以滅菌操作于每100毫升營養(yǎng)瓊脂加滅菌脫纖維羊血或兔血5-10毫升,輕輕搖勻，立即傾注于平板或分裝試管，制成斜面?zhèn)溆谩?/div>
四、應(yīng)用
用于新生兒17α-羥孕酮和總半乳糖測定試劑及妊娠相關(guān)蛋白A(PAPP-A)質(zhì)控品的研制研究：
以脫纖維綿羊全血作為校準品、質(zhì)控品配制用基質(zhì)。具體過程是：采用17a-羥孕酮抗原配制校準品,以17a-羥孕酮歐洲標準品為對照,在PE公司17a-羥孕酮試劑盒上進行校準品的標定。
標定后的校準品濃度分別為Ong/ml、1.3ng/ml、3.2ng/ml、7ng/ml、25ng/ml和100ng/ml。通過本底熒光值及劑量-反應(yīng)曲線范圍、相關(guān)系數(shù)等指標,確定包被板、包被體積等條件；對二抗和一抗進行兩兩配對比較；選擇抗原偶聯(lián)物進行銪標記并純化；對不同稀釋比例的標記抗原偶聯(lián)物與不同濃度的二抗進行配對實驗等。
新生兒總半乳糖定量測定試劑(熒光分析法)的反應(yīng)原理是：濾紙干血片中的總半乳糖在半乳糖脫氫酶的催化作用下,與NAD反應(yīng),生成半乳糖內(nèi)酯和NADH。用熒光檢測儀在激發(fā)波長355nm和發(fā)射波長460nm條件下,測定生成物NADH的熒光強度,其熒光強度與總半乳糖的濃度成正比。以脫纖維綿羊全血作為校準品、質(zhì)控品配制用基質(zhì)。
采用半乳糖-1-磷酸配制校準品,通過芬蘭Labsystem公司新生兒半乳糖檢測試劑盒(熒光分析法)進行標定,標定后的校準品濃度依次為：Omg/dl、5mg/dl、10mg/dl、20mg/dl、40mg/dl、60mg/dl。采用本底熒光值及劑量-反應(yīng)曲線范圍、相關(guān)系數(shù)等指標,選擇合適的包被板和主要原材料,選擇堿性磷酸酶：半乳糖脫氫酶:NADH混合反應(yīng)液配比,并對銅試劑的各反應(yīng)條件進行優(yōu)化,如硫酸銅溶液的不同稀釋比例(1：10000、1：1000、1：100和1：10)、碳酸鈉-酒石酸鉀鈉緩沖液和硫酸銅溶液的不同比例(3：2、1：1、2：1)；對試劑加樣體積和反應(yīng)時間進行研究。
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