免疫細(xì)胞無血清培養(yǎng)基的背景知識及應(yīng)用研究！
小楊 / 2024-08-19 08:50:23
一、背景
免疫細(xì)胞無血清培養(yǎng)基是無血清、不含異源動(dòng)物成分（Xeno-free）的人免疫細(xì)胞培養(yǎng)基，可用于人淋巴細(xì)胞、CIK、DC、NK等各類免疫細(xì)胞的培養(yǎng)，具有很高的成活率、殺傷活性和擴(kuò)增倍數(shù)。
無血清培養(yǎng)基，顧名思義，就是在細(xì)胞培養(yǎng)中不需要添加血清，但是在某些應(yīng)用中可能要添加生長因子或細(xì)胞因子。無血清培養(yǎng)基中添加了血清的主要成分：粘附因子、生長因子、必需的營養(yǎng)物質(zhì)和激素等，能減少血清帶來的不利因素，使細(xì)胞培養(yǎng)的條件更穩(wěn)定。經(jīng)歷了天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基后，無血清培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)成為當(dāng)今細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一大趨勢。采用無血清培養(yǎng)可簡化純化和鑒定各種細(xì)胞產(chǎn)物的程序，避免病毒污染造成的危害。
無血清培養(yǎng)基是不需要添加血清就可以維持細(xì)胞在體外較長時(shí)間生長繁殖的合成培養(yǎng)基。傳統(tǒng)細(xì)胞培養(yǎng)基含有異源血清成分，如牛血清，細(xì)胞培養(yǎng)中使用牛血清存在污染外源病毒和致病因子的風(fēng)險(xiǎn)：由于不同批次牛血清間的生物活性和因子的不一致，導(dǎo)致產(chǎn)品和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)性差。
制品中殘留的牛血清易引起接種者對血清的過敏反應(yīng)。因此，采用牛血清替代物作為添加劑的無血清培養(yǎng)基，添加了粘附因子、生長因子、必需的營養(yǎng)物質(zhì)和激素等，能減少血清帶來的不利因素，使細(xì)胞培養(yǎng)的條件更穩(wěn)定。
二、應(yīng)用
用于人類外周血免疫細(xì)胞體外培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的建立和個(gè)體化差異研究：
為確保免疫細(xì)胞(DC和CIK)體外采集、分離、培養(yǎng)、凍存等操作規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化,得到符合臨床應(yīng)用級別的細(xì)胞,確保細(xì)胞免疫治療疾病以安全、有效的方式進(jìn)行,本室遵循國內(nèi)外相關(guān)法規(guī),以及歐盟和中國良好生產(chǎn)規(guī)范(Good Manufacturing Practice,GMP)的要求,以期建立DC和CIK體外操作的一系列標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(Standard Operating Procedure,SOP),并初步制定DC和CIK質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
分別對1例早期乳腺癌、1例晚期卵巢癌和5例健康成年人的免疫細(xì)胞,在培養(yǎng)前、后的細(xì)胞數(shù)量、細(xì)胞表型和功能進(jìn)行比較,初步探討不同個(gè)體間(健康人或腫瘤患者)的免疫細(xì)胞表型和功能的差異,為個(gè)體化的細(xì)胞免疫治療腫瘤提供初步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
方法：以《人體細(xì)胞治療研究和制劑質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則》、《白體免疫細(xì)胞治療技術(shù)管理規(guī)范》、《中國藥典》、歐盟GMP、《中國GMP實(shí)施指南》等為指導(dǎo),針對前體細(xì)胞-外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC)的采集、分離、凍存,DC.CIK培養(yǎng)和擴(kuò)增、表型鑒定和功能檢測等過程,制定SOP；遵循已制定的SOP,對DC和CIK體外培養(yǎng)和檢測等過程進(jìn)行質(zhì)量控制；對1例早期乳腺癌、1例晚期卵巢癌和5例健康人分離得到PBMC.培養(yǎng)擴(kuò)增得到的DC和CIK進(jìn)行免疫相關(guān)參數(shù)的比較。
結(jié)果：
1、通過研究,已初步建立一系列DC、CIK體外操作相關(guān)的SOP；遵循這些SOP,對免疫細(xì)胞體外操作過程進(jìn)行了質(zhì)量控制,并初步獲得了DC和CIK細(xì)胞質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
2、發(fā)現(xiàn)在自體血漿培養(yǎng)條件下與在胎牛血清和人AB血清條件下培養(yǎng)得到的DC表型和功能相比,并無顯著性差別。
3、呈粘附生長狀態(tài)的DC與傳統(tǒng)的非粘附生長的DC相比,其表型和功能也無顯著差別,是質(zhì)量合格的DC,在收獲DC時(shí)無需丟棄。
4、免疫細(xì)胞個(gè)體化差異的初步研究表明：在不同個(gè)體間,免疫細(xì)胞在培養(yǎng)前后,其細(xì)胞數(shù)量、表型和功能等方面都存在差異,為個(gè)體化的細(xì)胞免疫治療提供了初步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
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