2015版中國藥典無菌檢查法（1）
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2016-01-13 15:10:35
-2015版中國藥典無菌檢查法
無菌檢查法系用于檢查藥典要求無菌的藥品、生物制品、醫(yī)療器具、原料、輔料、及其他品種是否無菌的一種方法。若供試品符合無菌檢查法的規(guī)定,僅表明了供試品在該檢驗(yàn)條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。
無菌檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度B 級(jí)背景下的局部A 級(jí)潔凈度的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行，其全過程應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。單向流空氣區(qū)、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法》的現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度確認(rèn)。隔離系統(tǒng)應(yīng)定期按相關(guān)的要求進(jìn)行驗(yàn)證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無菌檢查的要求。日常檢驗(yàn)還需對(duì)試驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)控。
無菌檢查人員必須具備微生物專業(yè)知識(shí)，并經(jīng)過無菌技術(shù)的培訓(xùn)。
培養(yǎng)基
硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基主要用于厭氧菌的培養(yǎng)，也可用于需氣菌培養(yǎng)；胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基適用于真菌和需氣菌的培養(yǎng)。培養(yǎng)基的制備及培養(yǎng)條件培養(yǎng)基可按以下處方制備，亦可使用按該處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。配制后應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在2～25℃、避光的環(huán)境，若保存于非密閉容器中，一般在3周內(nèi)使用；若保存于密閉容器中，一般可在一年內(nèi)使用。
1. 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基
酪胨 (胰酶水解) 15.0g 酵母浸出粉 5.0g
葡萄糖 5.0g 氯化鈉 2.5g
L-胱氨酸 0.5g 新配制的 0.1% 刃天青溶液 1.0ml
硫乙醇酸鈉 0.5g 瓊脂 0.75g
(或硫乙醇酸) （ 0.3 ml) 純化水 1000ml
除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH 為弱堿性，煮沸，濾清，加入葡萄糖和刃天青溶液，搖勻，調(diào)節(jié)pH 值使滅菌后為7.1±0.2。分裝至適宜的容器中，其裝量與容器高度的比例應(yīng)符合培養(yǎng)結(jié)束后培2養(yǎng)基氧化層（粉紅色）不超過培養(yǎng)基深度的1/2。滅菌。在供試品接種前，培養(yǎng)基氧化層的高度不得超過培養(yǎng)基深度的1/5，否則，須經(jīng)100℃水浴加熱至粉紅色消失（不超過20 分鐘），迅速冷卻，只限加熱一次，并防止被污染。除另有規(guī)定外，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置30～35℃培養(yǎng)。
2. 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基
胰酪胨 17.0g 氯化鈉 5.0g
大豆木瓜蛋白酶消化物 3.0g 磷酸氫二鉀 2.5g
葡萄糖（一水合/無水） 2.5g （2.3g） 純化水 1000mL
除葡萄糖外，取上述成分，混合，微溫溶解，濾過，調(diào)節(jié)pH 值使滅菌后在25℃的pH 值為7.3±0.2，加入葡萄糖，分裝，滅菌。胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基置20～25℃培養(yǎng)。
3. 選擇性培養(yǎng)基
按上述硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基的處方及制法，在培養(yǎng)基滅菌或使用前加入適宜的中和劑、滅活劑或表面活性劑，其用量同方法適用性試驗(yàn)。
4. 0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基（用于硫酸鏈霉素等抗生素的無菌檢查）
胨 10.0g 氯化鈉 5.0g
葡萄糖 5.0g 水 1000 ml
牛肉浸出粉 3.0g
除葡萄糖外，取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)節(jié) pH 為弱堿性，煮沸，加入葡萄糖溶解后，搖勻，濾清，調(diào)節(jié) pH 值使滅菌后在25℃的pH 值為7.2±0.2，分裝，滅菌。
5. 胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基
胰酪胨 15.0g 氯化鈉 5.0g
大豆木瓜蛋白酶水解物 5.0g 瓊脂 15.0g
純化水 1000ml
除瓊脂外，取上述成分，混合。微溫溶解，調(diào)節(jié)pH 值使滅菌后在25℃的pH 值為7.3±0.2，加入瓊脂，加熱溶化后，搖勻，分裝，滅菌。
6.沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基
動(dòng)物組織胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物 10.0g
葡萄糖 20.0g 純化水 1000mL
除葡萄糖外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH 值使滅菌后在25℃的pH 值為5.6±0.2，加入葡萄糖，搖勻，分裝，滅菌。
7. 沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基
動(dòng)物組織胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物 10.0g
葡萄糖 40.0g 純化水 1000mL
瓊脂 15.0g
除葡萄糖、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后在25℃的pH值為5.6±0.2，加入瓊脂,加熱溶化后, 再加入葡萄糖，搖勻，分裝，滅菌。
培養(yǎng)基的適用性檢查
無菌檢查用的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基等應(yīng)符合培養(yǎng)基的無菌性檢查及靈敏度檢查的要求。本檢查可在供試品的無菌檢查前或與供試品的無菌檢查同時(shí)進(jìn)行。
無菌性檢查 每批培養(yǎng)基隨機(jī)取不少于5 支（瓶），置各培養(yǎng)基規(guī)定的溫度培養(yǎng)14 天，應(yīng)無菌生長。
靈敏度檢查
菌種 培養(yǎng)基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5 代（從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為第0 代），并采用適宜的菌種保存技術(shù)進(jìn)行保存，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。
金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B) 26 003〕
銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa) 〔CMCC(B) 10 104〕
枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕
生孢梭菌(Clostridium sporogenes)〔CMCC(B) 64 941〕
白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F) 98 001〕
黑曲霉(Aspergillus niger) 〔CMCC(F) 98 003〕
上一篇： 地衣芽孢桿菌 特性
下一篇：無菌檢查法-菌液制備