供試品處理及接種培養(yǎng)基
中國(guó)微生物菌種查詢網(wǎng) / 2016-01-13 15:17:58
供試品處理及接種培養(yǎng)基
操作時(shí)，用適宜的消毒液對(duì)供試品容器表面進(jìn)行徹底消毒，如果供試品容器內(nèi)有一定的真空度，可用適宜的無(wú)菌器材（如帶有除菌過(guò)濾器的針頭）向容器內(nèi)導(dǎo)入無(wú)菌空氣，再按無(wú)菌操作啟開容器取出內(nèi)容物。除另有規(guī)定外，按下列方法進(jìn)行供試品處理及接種培養(yǎng)基。
1.薄膜過(guò)濾法
薄膜過(guò)濾法應(yīng)采用封閉式薄膜過(guò)濾器。無(wú)菌檢查用的濾膜孔徑應(yīng)不大于0.45μm。直徑約為50mm。根據(jù)供試品及其溶劑的特性選擇濾膜材質(zhì)。抗生素供試品應(yīng)選擇低吸附的濾器及濾膜。濾器及濾膜使用前應(yīng)采用適宜的方法滅菌。使用時(shí)，應(yīng)保證濾膜在過(guò)濾前后的完整性。
水溶性供試液過(guò)濾前應(yīng)先將少量的沖洗液過(guò)濾以潤(rùn)濕濾膜。油類供試品，其濾膜和過(guò)濾器在使用前應(yīng)充分干燥。為發(fā)揮濾膜的最大過(guò)濾效率，應(yīng)注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個(gè)濾膜表面。供試液經(jīng)薄膜過(guò)濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量一般為100ml，且總沖洗量不得超過(guò)1000ml，以避免濾膜上的微生物受損傷。
水溶液供試品 取規(guī)定量，直接過(guò)濾，或混合至含不少于100ml 適宜稀釋液的無(wú)菌容器中，混勻，立即過(guò)濾。如供試品具有抑菌作用，須用沖洗液沖洗濾膜，沖洗次數(shù)一般不少于三次，所用的沖洗量、沖洗方法同方法適用性試驗(yàn)。除生物制品外，一般樣品沖洗后，1 份濾器加入100ml 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，1 份濾器加入100ml 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。生物制品樣品沖洗后， 2 份濾器加入100ml 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，1 份濾器加入100ml 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。
水溶性固體供試品 取規(guī)定量，加適宜的稀釋液溶解或按標(biāo)簽說(shuō)明復(fù)溶，然后照水溶液供試品項(xiàng)下的方法操作。
非水溶性供試品 取規(guī)定量，直接過(guò)濾；或混合溶于適量含聚山梨酯80或其他適宜乳化劑的稀釋液中，充分混合，立即過(guò)濾。用含0.1～1%聚山梨酯80 的沖洗液沖洗濾膜至少3 次。加入含或不含聚山梨酯80 的培養(yǎng)基。接種培養(yǎng)基照水溶液供試品項(xiàng)下的方法操作。
可溶于十四烷酸異丙酯的膏劑和粘性油劑供試品 取規(guī)定量，混合至適量的無(wú)菌十四烷酸異丙酯①中，劇烈振搖，使供試品充分溶解，如果需要可適當(dāng)加熱，但溫度不得超過(guò)44℃，趁熱迅速過(guò)濾。對(duì)仍然無(wú)法過(guò)濾的供試品，于含有適量的無(wú)菌十四烷酸異丙酯中的供試液中加入不少于100ml 的稀釋液，充分振搖萃取，靜置，取下層水相作為供試液過(guò)濾。過(guò)濾后濾膜沖洗及接種培養(yǎng)基照非水溶性制劑供試品項(xiàng)下的方法操作。
無(wú)菌氣（噴）霧劑供試品 取規(guī)定量，將各容器置－20℃以下的冰室冷凍約1 小時(shí)。以無(wú)菌操作迅速在容器上端鉆一小孔，釋放拋射劑后再無(wú)菌開啟容器，并將供試液轉(zhuǎn)移至無(wú)菌容器中，然后照水溶液或非水溶性制劑供試品項(xiàng)下的方法操作。
裝有藥物的注射器供試品 取規(guī)定量，將注射器中的內(nèi)容物（若需要可吸入稀釋液或標(biāo)簽所示的溶劑溶解）直接過(guò)濾，或混合至含適宜稀釋液的無(wú)菌容器中，然后按水溶液或非水溶性供試品項(xiàng)下方法操作。同時(shí)應(yīng)采用適宜的方法進(jìn)行包裝中所配帶的無(wú)菌針頭的無(wú)菌檢查。
具有導(dǎo)管的醫(yī)療器具(輸血、輸液袋等)供試品 取規(guī)定量，每個(gè)最小包裝用50～100ml 沖洗液分別沖洗內(nèi)壁，收集沖洗液于無(wú)菌容器中，然后照水溶液供試品項(xiàng)下方法操作。同時(shí)應(yīng)采用直接接種法進(jìn)行包裝中所配帶的針頭的無(wú)菌檢查。
2. 直接接種法
直接接種法適用于無(wú)法用薄膜過(guò)濾法進(jìn)行無(wú)菌檢查的供試品，即取規(guī)定量供試品分別等量接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中。除生物制品外，一般樣品無(wú)菌檢查時(shí)兩種培養(yǎng)基接種的支/瓶數(shù)相等；生物制品無(wú)菌檢查時(shí)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基接種的支/瓶數(shù)為2：1。除另有規(guī)定外，每個(gè)容器中培養(yǎng)基的用量應(yīng)符合接種的供試品體積不得大于培養(yǎng)基體積的10%，同時(shí)，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基每管裝量不少于15ml，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基每管裝量不少于10ml。供試品檢查時(shí)，培養(yǎng)基的用量和高度同方法適用性試驗(yàn)。
混懸液等非澄清水溶液供試品 取規(guī)定量，等量接種至各管培養(yǎng)基中。
固體供試品 取規(guī)定量，直接等量接種至各管培養(yǎng)基中?；蚣尤脒m宜的溶劑溶解，或按標(biāo)簽說(shuō)明復(fù)溶后，取規(guī)定量等量接種至各管培養(yǎng)基中。
非水溶性供試品 取規(guī)定量，混合，加入適量的聚山梨酯80 或其它適宜的乳化劑及稀釋劑使其乳化，等量接種至各管培養(yǎng)基中?；蛑苯拥攘拷臃N至含聚山梨酯80 或其它適宜乳化劑的各管培養(yǎng)基中。
敷料供試品 取規(guī)定數(shù)量，以無(wú)菌操作拆開每個(gè)包裝，于不同部位剪取約100mg 或1cm×3cm 的供試品，等量接種于各管足以浸沒(méi)供試品的適量培養(yǎng)基中。
腸線、縫合線等供試品 腸線、縫合線及其它一次性使用的醫(yī)用材料按規(guī)定量取最小包裝，無(wú)菌拆開包裝，等量接種于各管足以浸沒(méi)供試品的適量培養(yǎng)基中。
滅菌醫(yī)用器具供試品 取規(guī)定量，必要時(shí)應(yīng)將其拆散或切成小碎段，等量接種于各管足以浸沒(méi)供試品的適量培養(yǎng)基中。
放射性藥品 取供試品1 瓶(支)，等量接種于裝量為7.5ml 的硫乙醇酸流液體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中。每管接種量為0.2ml。
培養(yǎng)及觀察
將上述接種供試品后的培養(yǎng)基容器分別按各培養(yǎng)基規(guī)定的溫度培養(yǎng)14天；接種生物制品供試品的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的容器應(yīng)分成兩等份，一份置30～35℃培養(yǎng)，一份置20～25℃培養(yǎng)。培養(yǎng)期間應(yīng)逐日觀察并記錄是否有菌生長(zhǎng)。如在加入供試品后或在培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14 天后，不能從外觀上判斷有無(wú)微生物生長(zhǎng)，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中，培養(yǎng)3 天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁；或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。
結(jié)果判斷
陽(yáng)性對(duì)照管應(yīng)生長(zhǎng)良好，陰性對(duì)照管不得有菌生長(zhǎng)。否則，試驗(yàn)無(wú)效。若供試品管均澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定；若供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效，即生長(zhǎng)的微生物非供試品所含。當(dāng)符合下列至少一個(gè)條件時(shí)方可判試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效：
（1）無(wú)菌檢查試驗(yàn)所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無(wú)菌檢查法的要求。
（2）回顧無(wú)菌試驗(yàn)過(guò)程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素。
（3）供試品管中生長(zhǎng)的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無(wú)菌試驗(yàn)中所使用的物品和（或）無(wú)菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。
試驗(yàn)若經(jīng)確認(rèn)無(wú)效，應(yīng)重試。重試時(shí)，重新取同量供試品，依法檢查，若無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定；若有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定
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