干粉培養(yǎng)基煮沸滅菌的準備工作與操作流程及常見問題！
小楊 / 2025-08-15 10:41:29
干粉培養(yǎng)基（如
改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基等）的煮沸滅菌并非標準滅菌方式（常規(guī)采用高壓蒸汽滅菌），但在缺乏高壓滅菌設備的特殊情況下，可通過持續(xù)煮沸實現(xiàn)一定程度的滅菌（僅適用于對無菌要求不高的場景，如基礎教學演示）。以下是具體操作方法及注意事項：
一、操作前準備
1、干粉培養(yǎng)基溶解
按配方稱取干粉培養(yǎng)基，加入適量純化水，攪拌均勻后加熱煮沸，使所有成分（尤其是瓊脂）完全溶解，補足水量至規(guī)定體積（如 1000mL）。
若需調節(jié) pH，在此步驟完成（方法同前），確保溶液澄清或均勻混懸。
2、容器與工具
選用耐高溫容器（如玻璃燒杯、不銹鋼鍋），容量需大于培養(yǎng)基體積（避免煮沸時溢出）。
準備石棉網(wǎng)（或電熱板）、酒精燈、溫度計（量程 0~100℃）、滅菌棉塞（或硅膠塞）、牛皮紙（用于包裹容器口）。
二、煮沸滅菌操作步驟
1、分裝與密封
將溶解好的培養(yǎng)基趁熱分裝至耐高溫容器中，液面距離容器口 3~5cm（預留沸騰空間）。
容器口塞緊棉塞（松緊適度，既能透氣又能減少雜菌進入），外包牛皮紙并扎緊（防止棉塞受潮污染）。
2、持續(xù)煮沸滅菌
將容器放入盛有適量水的鍋中（水位低于容器內培養(yǎng)基液面，避免水進入培養(yǎng)基），或直接在石棉網(wǎng)上加熱容器。
加熱至培養(yǎng)基沸騰（100℃），保持持續(xù)沸騰 30~60 分鐘（根據(jù)體積調整：500mL 以下 30 分鐘，1000mL 需 60 分鐘）。
煮沸過程中：
隨時觀察，補充鍋中水分（避免干鍋），同時防止培養(yǎng)基溢出。
若有泡沫產(chǎn)生，可輕微攪拌或降低火力，避免泡沫頂開棉塞。
3、滅菌后處理
煮沸結束后，關火，待培養(yǎng)基稍冷卻（避免驟冷導致容器破裂），取出容器，置于潔凈處自然冷卻。
若需倒平板，待培養(yǎng)基冷卻至 50~60℃時，在無菌環(huán)境中操作（如超凈臺），倒平板后凝固備用。
三、注意事項
1、滅菌局限性
煮沸滅菌（100℃）僅能殺滅繁殖體（如細菌營養(yǎng)體、真菌孢子），無法殺滅芽孢（如
枯草芽孢桿菌等），因此無菌效果遠不及高壓蒸汽滅菌（121℃），不適用于醫(yī)療、科研等嚴格無菌要求的場景。
2、成分穩(wěn)定性
長時間煮沸可能破壞培養(yǎng)基中的熱敏成分（如葡萄糖、維生素），影響營養(yǎng)效果，尤其對真菌培養(yǎng)基（如改良馬?。赡芙档驼婢L效率。
3、污染風險
煮沸過程中若棉塞受潮、容器密封不嚴，可能導致二次污染；滅菌后倒平板時需嚴格無菌操作。
四、總結
煮沸滅菌僅為應急手段，不建議替代高壓蒸汽滅菌。對于微生物培養(yǎng)（尤其是真菌、細菌分離），優(yōu)先采用 121℃、20 分鐘高壓滅菌，以確保培養(yǎng)基無菌性和營養(yǎng)有效性。
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