干粉培養(yǎng)基煮沸滅菌的準(zhǔn)備工作與操作流程及常見問題！
小楊 / 2025-08-15 10:41:29
干粉培養(yǎng)基（如
改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基等）的煮沸滅菌并非標(biāo)準(zhǔn)滅菌方式（常規(guī)采用高壓蒸汽滅菌），但在缺乏高壓滅菌設(shè)備的特殊情況下，可通過持續(xù)煮沸實(shí)現(xiàn)一定程度的滅菌（僅適用于對(duì)無(wú)菌要求不高的場(chǎng)景，如基礎(chǔ)教學(xué)演示）。以下是具體操作方法及注意事項(xiàng)：
一、操作前準(zhǔn)備
1、干粉培養(yǎng)基溶解
按配方稱取干粉培養(yǎng)基，加入適量純化水，攪拌均勻后加熱煮沸，使所有成分（尤其是瓊脂）完全溶解，補(bǔ)足水量至規(guī)定體積（如 1000mL）。
若需調(diào)節(jié) pH，在此步驟完成（方法同前），確保溶液澄清或均勻混懸。
2、容器與工具
選用耐高溫容器（如玻璃燒杯、不銹鋼鍋），容量需大于培養(yǎng)基體積（避免煮沸時(shí)溢出）。
準(zhǔn)備石棉網(wǎng)（或電熱板）、酒精燈、溫度計(jì)（量程 0~100℃）、滅菌棉塞（或硅膠塞）、牛皮紙（用于包裹容器口）。
二、煮沸滅菌操作步驟
1、分裝與密封
將溶解好的培養(yǎng)基趁熱分裝至耐高溫容器中，液面距離容器口 3~5cm（預(yù)留沸騰空間）。
容器口塞緊棉塞（松緊適度，既能透氣又能減少雜菌進(jìn)入），外包牛皮紙并扎緊（防止棉塞受潮污染）。
2、持續(xù)煮沸滅菌
將容器放入盛有適量水的鍋中（水位低于容器內(nèi)培養(yǎng)基液面，避免水進(jìn)入培養(yǎng)基），或直接在石棉網(wǎng)上加熱容器。
加熱至培養(yǎng)基沸騰（100℃），保持持續(xù)沸騰 30~60 分鐘（根據(jù)體積調(diào)整：500mL 以下 30 分鐘，1000mL 需 60 分鐘）。
煮沸過程中：
隨時(shí)觀察，補(bǔ)充鍋中水分（避免干鍋），同時(shí)防止培養(yǎng)基溢出。
若有泡沫產(chǎn)生，可輕微攪拌或降低火力，避免泡沫頂開棉塞。
3、滅菌后處理
煮沸結(jié)束后，關(guān)火，待培養(yǎng)基稍冷卻（避免驟冷導(dǎo)致容器破裂），取出容器，置于潔凈處自然冷卻。
若需倒平板，待培養(yǎng)基冷卻至 50~60℃時(shí)，在無(wú)菌環(huán)境中操作（如超凈臺(tái)），倒平板后凝固備用。
三、注意事項(xiàng)
1、滅菌局限性
煮沸滅菌（100℃）僅能殺滅繁殖體（如細(xì)菌營(yíng)養(yǎng)體、真菌孢子），無(wú)法殺滅芽孢（如
枯草芽孢桿菌等），因此無(wú)菌效果遠(yuǎn)不及高壓蒸汽滅菌（121℃），不適用于醫(yī)療、科研等嚴(yán)格無(wú)菌要求的場(chǎng)景。
2、成分穩(wěn)定性
長(zhǎng)時(shí)間煮沸可能破壞培養(yǎng)基中的熱敏成分（如葡萄糖、維生素），影響營(yíng)養(yǎng)效果，尤其對(duì)真菌培養(yǎng)基（如改良馬?。?，可能降低真菌生長(zhǎng)效率。
3、污染風(fēng)險(xiǎn)
煮沸過程中若棉塞受潮、容器密封不嚴(yán)，可能導(dǎo)致二次污染；滅菌后倒平板時(shí)需嚴(yán)格無(wú)菌操作。
四、總結(jié)
煮沸滅菌僅為應(yīng)急手段，不建議替代高壓蒸汽滅菌。對(duì)于微生物培養(yǎng)（尤其是真菌、細(xì)菌分離），優(yōu)先采用 121℃、20 分鐘高壓滅菌，以確保培養(yǎng)基無(wú)菌性和營(yíng)養(yǎng)有效性。
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