含藥雙料腸球菌肉湯培養(yǎng)基管的使用方法和注意事項(xiàng)有哪些？
小楊 / 2025-10-11 09:31:42
百歐博偉生物：含藥雙料腸球菌肉湯培養(yǎng)基管是在雙料腸球菌肉湯基礎(chǔ)上添加特定抗生素或抑菌藥物的專用增菌培養(yǎng)基，核心功能是選擇性增菌腸球菌（抑制雜菌生長），常用于需排除其他耐藥菌干擾的場(chǎng)景（如食品、藥品中腸球菌的特異性檢測(cè)，或耐藥腸球菌的篩選）。其“雙料”特性適配 10mL 大體積樣本接種，“含藥”特性實(shí)現(xiàn)雜菌抑制，以下是詳細(xì)使用方法及注意事項(xiàng)：
一、使用前核心確認(rèn)（含藥培養(yǎng)基特有步驟）
使用前需優(yōu)先明確藥物成分及作用（因不同含藥配方針對(duì)的雜菌不同，需匹配檢測(cè)目的），常見添加藥物及功能如下：
如添加疊氮鈉：抑制革蘭氏陰性菌及部分革蘭氏陽性菌（如
葡萄球菌），僅允許腸球菌生長；
如添加萬古霉素：篩選耐萬古霉素腸球菌（VRE），抑制敏感腸球菌及其他革蘭氏陽性菌；
具體藥物種類、濃度需以培養(yǎng)基說明書為準(zhǔn)。
二、詳細(xì)使用方法
（一）使用前準(zhǔn)備
1、外觀與藥物穩(wěn)定性檢查
確認(rèn)試管無破損、漏液，培養(yǎng)基為淡黃色透明液體（無渾濁、沉淀、變色，若含藥物沉淀需按說明書判斷：可溶解沉淀需加熱復(fù)溶，不可溶解則為變質(zhì)）；
含藥培養(yǎng)基需注意藥物有效期（部分藥物易降解，需在規(guī)定時(shí)間內(nèi)使用，不可反復(fù)加熱）。
2、復(fù)溶與藥物溶解（僅干粉預(yù)制管）
按說明書加入無菌純化水（雙料管通常加 20mL，與普通雙料一致），輕輕顛倒至干粉完全溶解；
若藥物為單獨(dú)添加的無菌藥液（非預(yù)混干粉），需在培養(yǎng)基滅菌冷卻至45℃±1℃ 時(shí)（手觸不燙，避免藥物受熱降解），無菌操作加入藥液，輕輕混勻（不可劇烈搖晃，防止藥物分布不均）。
3、滅菌（僅非無菌成品管，需注意藥物耐熱性）
預(yù)混藥物的培養(yǎng)基：若藥物耐熱，可 121℃、103.4kPa 滅菌 15 分鐘；
不耐熱藥物：需先對(duì)基礎(chǔ)雙料肉湯滅菌，冷卻后再無菌添加無菌藥液（避免高溫破壞藥物活性）；
滅菌后冷卻至36℃±1℃ 備用（不可冷卻至室溫后久置，防止雜菌污染）。
（二）樣本接種與培養(yǎng)
1、無菌接種（適配雙料特性）
在無菌超凈工作臺(tái)內(nèi)，取10mL 待檢樣本（如原水樣、低稀釋度食品勻漿，雙料適配大體積接種），無菌加入培養(yǎng)基管中，輕輕顛倒 2-3 次混勻（避免藥液溢出或氣泡過多）；
必須設(shè)置3 組對(duì)照（含藥培養(yǎng)基對(duì)照要求更嚴(yán)格，需排除藥物干擾）：
陽性對(duì)照 1：接種目標(biāo)腸球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株（如耐疊氮鈉的
糞腸球菌 ATCC 29212）→ 驗(yàn)證培養(yǎng)基營養(yǎng)及藥物不抑制目標(biāo)菌；
陰性對(duì)照：僅加 10mL 無菌純化水→ 驗(yàn)證培養(yǎng)基及操作無外源污染。
2、培養(yǎng)條件
放入36℃±1℃恒溫培養(yǎng)箱，需氧培養(yǎng)24h±2h；若 24h 無生長，可延長至48h±2h（部分耐藥腸球菌生長較慢）。
（三）結(jié)果觀察與判斷
含藥培養(yǎng)基的結(jié)果判斷邏輯與普通雙料一致，但需結(jié)合“藥物抑制雜菌”的特性解讀：
結(jié)果類型 外觀現(xiàn)象 解讀
陽性（目標(biāo)腸球菌生長） 培養(yǎng)基均勻渾濁，若含溴甲酚紫指示劑則由紫變黃；敏感雜菌對(duì)照管澄清。 樣本中可能存在目標(biāo)腸球菌（如耐藥腸球菌），需進(jìn)一步劃線分離（如腸球菌選擇性瓊脂）并鑒定。
陰性（無目標(biāo)腸球菌生長） 培養(yǎng)基澄清，指示劑不變色；陽性對(duì)照 1 渾濁變色（證明培養(yǎng)基有效），陽性對(duì)照 2 澄清（證明藥物有效）。 樣本中目標(biāo)腸球菌數(shù)量低于檢測(cè)限，或無目標(biāo)腸球菌污染。
結(jié)果無效 陽性對(duì)照 1 澄清（藥物抑制目標(biāo)菌，可能藥物過量或失效）；陽性對(duì)照 2 渾濁（藥物失效，無法抑制雜菌）；陰性對(duì)照渾濁（操作污染）。 需排查藥物濃度、滅菌過程或操作，重新實(shí)驗(yàn)。
三、核心注意事項(xiàng)（含藥培養(yǎng)基特有 + 雙料通用）
（一）含藥培養(yǎng)基特有注意事項(xiàng)
1、藥物活性保障
嚴(yán)格按說明書處理藥物（如不耐熱藥物需“后添加”，避免高溫降解）；若培養(yǎng)基滅菌后出現(xiàn)藥物變色（如萬古霉素溶液變粉紅），需丟棄（藥物已失效）。
避免反復(fù)加熱含藥培養(yǎng)基（藥物易降解，導(dǎo)致雜菌抑制失效，出現(xiàn)假陽性）。
2、對(duì)照有效性是關(guān)鍵
必須同時(shí)設(shè)置“目標(biāo)菌對(duì)照”和“敏感雜菌對(duì)照”：僅目標(biāo)菌對(duì)照生長、雜菌對(duì)照不生長，才能證明藥物“既不抑制目標(biāo)菌，又能殺雜菌”，否則結(jié)果無效（如雜菌對(duì)照生長，可能藥物失效，需更換培養(yǎng)基）。
3、藥物濃度適配性
不同批次培養(yǎng)基的藥物濃度可能有差異，需以說明書為準(zhǔn)（如疊氮鈉濃度過高可能抑制腸球菌，過低則無法抑制雜菌），不可自行添加藥物調(diào)整濃度。
（二）雙料培養(yǎng)基通用注意事項(xiàng)
1、接種量嚴(yán)格匹配
僅可接種 10mL 樣本（雙料濃度適配大體積，若接種 1mL/0.1mL 小樣本，會(huì)導(dǎo)致藥物濃度過高，抑制腸球菌生長，出現(xiàn)假陰性）。
2、無菌操作杜絕污染
含藥培養(yǎng)基雖能抑制部分雜菌，但無法抑制所有耐藥雜菌（如耐萬古霉素葡萄球菌），需全程在超凈臺(tái)操作，試管口經(jīng)火焰滅菌，避免外源耐藥雜菌污染。
3、后續(xù)鑒定不可省略
肉湯渾濁僅為“疑似陽性”，需劃線至選擇性瓊脂純化，通過生化試驗(yàn)或質(zhì)譜鑒定，確認(rèn)是否為目標(biāo)腸球菌（避免耐藥雜菌假陽性）。
四、總結(jié)
含藥雙料腸球菌肉湯的使用核心是“雙料適配 10mL 樣本 + 藥物實(shí)現(xiàn)選擇性增菌”，需重點(diǎn)關(guān)注藥物活性、對(duì)照驗(yàn)證及接種量匹配，其結(jié)果判斷需結(jié)合“藥物抑制雜菌”的特性，確保實(shí)驗(yàn)既無雜菌干擾，又不遺漏目標(biāo)腸球菌。
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