如何判斷溶血性鏈球菌培養(yǎng)實驗過程中是否受到了污染？
小楊 / 2025-12-06 09:51:05
溶血性鏈球菌培養(yǎng)過程是否被污染，核心是通過觀察菌落形態(tài)、溶血特征、微生物染色及生化反應(yīng)，對比目標菌的典型特性，識別“異常信號”，具體可按以下 4 個維度逐步排查：
一、最直觀：觀察培養(yǎng)基上的菌落“異常形態(tài)”
溶血性鏈球菌（如 A 群鏈球菌）在血瓊脂平板上有明確的典型形態(tài)，若出現(xiàn)與以下特征不符的菌落，大概率存在污染：
觀察指標 溶血性鏈球菌典型特征 污染菌的常見“異常表現(xiàn)”
菌落大小/形態(tài) 直徑 0.5~1mm，圓形、凸起、表面光滑、邊緣整齊，呈半透明或乳白色 出現(xiàn)更大菌落、扁平/粗糙菌落（如
枯草桿菌）、絨毛狀/絮狀菌落（如
霉菌）
溶血環(huán) 明確的 β- 溶血（完全溶血，環(huán)內(nèi)紅細胞完全破壞，呈透明無色）；少數(shù)為 α- 溶血（不完全溶血，環(huán)內(nèi)呈草綠色） 1.無溶血環(huán)（如大腸桿菌，僅菌落周圍有渾濁）；2.溶血環(huán)形態(tài)異常；3.同一平板出現(xiàn)多種溶血類型
菌落密度/分布 劃線分離后，單菌落呈“梯度分布”（劃線起始端密集，末端稀疏單菌落） 1.單菌落分布混亂，無明顯劃線梯度；2.整個平板長滿“菌苔”（雜菌大量繁殖，覆蓋目標菌）；3.非劃線區(qū)域出現(xiàn)孤立菌落（大概率是環(huán)境雜菌落入）
二、輔助判斷：觀察培養(yǎng)基本身的“異常變化”
除菌落外，培養(yǎng)基的整體狀態(tài)也能提示污染，尤其需關(guān)注以下 2 點：
1、培養(yǎng)基顏色/澄清度異常
正常血瓊脂平板為淡紅色（羊血顏色），若出現(xiàn)局部或整體變黃、變綠、變渾濁，或出現(xiàn)黏液狀、絮狀沉淀（如
大腸桿菌污染會導(dǎo)致培養(yǎng)基輕微渾濁，銅綠假單胞菌污染會使培養(yǎng)基呈綠色），可能是雜菌代謝產(chǎn)物改變了培養(yǎng)基環(huán)境。
2、培養(yǎng)基出現(xiàn)“非目標生長物”
如平板邊緣、蓋子內(nèi)側(cè)出現(xiàn)霉菌菌絲（白色/黑色絨毛狀）、黏液狀菌團，或培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基表面出現(xiàn)“水浸狀”擴散（如某些革蘭氏陰性桿菌快速繁殖導(dǎo)致），均為污染信號。
三、精準驗證：涂片染色 + 顯微鏡觀察
若通過菌落形態(tài)懷疑污染，需進一步通過革蘭氏染色 + 顯微鏡觀察確認，這是區(qū)分“目標菌”與“雜菌”的關(guān)鍵步驟：
操作方法：挑取可疑菌落（或同一平板上不同形態(tài)的菌落），涂片、革蘭氏染色后，在油鏡下觀察細菌形態(tài)。
判斷依據(jù)：
溶血性鏈球菌為革蘭氏陽性球菌，典型形態(tài)是 “鏈狀排列”（短鏈或長鏈，如 A 群鏈球菌多為長鏈）；
若顯微鏡下出現(xiàn)以下情況，可確診污染：
混雜革蘭氏陰性菌（如桿狀的大腸桿菌、弧狀的霍亂弧菌）；
混雜非鏈狀的革蘭氏陽性菌（如葡萄球菌的“葡萄狀排列”、肺炎鏈球菌的“雙球菌排列”）；
出現(xiàn)真菌（如霉菌的菌絲、酵母菌的圓形/橢圓形細胞）。
四、最終確認：生化反應(yīng)或血清學(xué)試驗排除
若染色后仍無法完全判斷（如混雜其他鏈球菌屬細菌），可通過生化反應(yīng)或血清學(xué)試驗進一步驗證，核心是利用溶血性鏈球菌的特異性生化特性排除雜菌：
1、生化反應(yīng)篩選：
溶血性鏈球菌（如 A 群）通常不分解菊糖、不被膽汁溶解（可與肺炎鏈球菌區(qū)分，后者分解菊糖且被膽汁溶解）；
若待檢菌能分解菊糖、或在膽汁培養(yǎng)基中溶解，或能發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣（如
大腸桿菌），則為雜菌污染。
2、血清學(xué)試驗（金標準）：
針對 A 群溶血性鏈球菌，可采用“血清分型試驗”（通過特異性抗體檢測細胞壁上的 C 抗原）；
若僅目標血清型陽性，其他型別或非鏈球菌細菌陰性，說明無污染；若出現(xiàn)多種血清型陽性，或非鏈球菌抗原陽性，則存在污染。
五、總結(jié)：判斷污染的“核心邏輯”
先通過菌落形態(tài) + 溶血環(huán)做初步篩查（快速識別明顯異常），再通過革蘭氏染色縮小范圍（區(qū)分革蘭氏陰/陽性、球菌/桿菌），最后通過生化/血清學(xué)試驗精準確認 —— 三步結(jié)合，可高效排除“假陽性懷疑”，明確是否存在外源性污染。
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