乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基的保存方法及其注意事項有哪些？
小楊 / 2025-12-24 09:23:08
乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基的保存核心是保持無菌、減少營養(yǎng)成分降解、避免水分流失，需根據(jù)培養(yǎng)基狀態(tài)針對性處理，以下是詳細保存方法及注意事項：
一、液態(tài)母液（滅菌后未倒平板）的保存
適用于暫時不使用，需后續(xù)按需倒板的場景，保存周期較短：
1、保存條件：
滅菌后趁熱分裝至無菌試劑瓶（避免冷卻后瓊脂凝固），瓶口用無菌硅膠塞密封，標注培養(yǎng)基名稱、配制日期。
置于 4℃冷藏冰箱 保存，避免冷凍（冷凍會導(dǎo)致瓊脂凝固后破裂，解凍后成分不均）。
保存期限：7-10 天，超過后營養(yǎng)成分（如葡萄糖、酵母浸粉中的維生素）會逐漸降解，且可能滋生污染菌（即使冷藏也無法完全抑制緩慢生長）。
2、使用前處理：
取出后置于水浴鍋（50-60℃）中加熱融化，攪拌均勻，確認無沉淀、無異味（若出現(xiàn)渾濁、異味則已污染，需丟棄）。
若 pH 有偏差，可在融化后冷卻至 40-50℃時微調(diào)，再倒平板。
二、凝固平板（已倒板）的保存
最常用的保存形式，方便直接接種使用：
1、保存前預(yù)處理：
平板凝固后（約 30 分鐘），立即倒置（避免表面水珠滴落導(dǎo)致菌落擴散），放入無菌保鮮袋或密封盒中（防止水分蒸發(fā)和交叉污染）。
標注培養(yǎng)基類型、配制日期（建議用馬克筆寫在皿底，避免皿蓋模糊）。
2、保存條件：
核心環(huán)境：4℃冷藏冰箱（避光保存，避免陽光直射，紫外線會破壞營養(yǎng)成分）。
濕度控制：密封袋內(nèi)可放入 1-2 張濕潤的無菌濾紙（避免平板水分過快流失，導(dǎo)致表面干裂），但需注意濾紙不接觸平板表面（防止污染）。
3、保存期限：
普通平板：1-2 周，超過后平板會逐漸干燥、營養(yǎng)耗盡，乳酸桿菌生長效果下降。
含選擇性添加物的平板：7 天內(nèi)使用完畢，抑制劑會隨時間降解，抑菌效果減弱，雜菌易污染。
4、使用前處理：
取出后置于超凈工作臺內(nèi)，倒置放入 37℃恒溫培養(yǎng)箱中“復(fù)溫 + 烘干”1-2 小時（去除表面冷凝水珠，避免接種后菌落擴散；同時讓培養(yǎng)基溫度接近菌種最適生長溫度，利于生長）。
若平板表面已干裂、出現(xiàn)雜菌菌落或異味，直接丟棄，不可使用。
三、長期保存（如需長期備用）
若需延長保存時間，可采用“冷凍干燥”或“分裝凍存”，但操作較復(fù)雜，適用于實驗室大量儲備：
1、冷凍干燥保存（針對純培養(yǎng)基粉末）：
未滅菌的干粉培養(yǎng)基：密封后置于陰涼干燥處（溫度 < 25℃，濕度 < 60%），避免受潮結(jié)塊，保質(zhì)期 1-2 年（參考原料保質(zhì)期）。
滅菌后的液態(tài)培養(yǎng)基：需在無菌條件下冷凍干燥（去除水分），制成干粉，密封后常溫保存，使用時用無菌水復(fù)溶、融化即可，保質(zhì)期 6-12 個月。
2、分裝凍存（針對液態(tài)培養(yǎng)基）：
滅菌后冷卻至 40-50℃，分裝至無菌凍存管（每管 10-20mL），密封后快速放入 - 20℃冷凍（避免緩慢冷凍導(dǎo)致瓊脂結(jié)晶）。
保存期限：3-6 個月，解凍時置于 37℃水浴快速融化，攪拌均勻后倒平板，若出現(xiàn)分層需重新加熱融化。
四、保存關(guān)鍵注意事項
無菌優(yōu)先：所有保存容器（試劑瓶、保鮮袋、凍存管）必須無菌，操作過程避免接觸非無菌表面，防止污染。
避免反復(fù)凍融：液態(tài)母液或凍存的培養(yǎng)基不可反復(fù)加熱融化 - 冷藏/冷凍，會導(dǎo)致瓊脂降解、營養(yǎng)成分破壞，且易滋生污染菌（建議分裝成小份，一次用完一份）。
禁止室溫長期存放：室溫下培養(yǎng)基（尤其是液態(tài)）易滋生雜菌，且營養(yǎng)成分降解速度快，即使是干粉培養(yǎng)基，室溫潮濕環(huán)境也會結(jié)塊變質(zhì)。
定期檢查：冷藏保存期間，每周檢查一次，若發(fā)現(xiàn)平板表面發(fā)霉、液態(tài)母液渾濁，立即丟棄，避免污染其他培養(yǎng)基。
適配菌種特性：乳酸桿菌偏好酸性環(huán)境，保存時無需調(diào)整 pH（倒板前已按配方調(diào)好），若保存過久 pH 升高（因乙酸鈉等成分分解），使用前需重新微調(diào)至 5.5-6.8。
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