一、細(xì)胞簡(jiǎn)介
平臺(tái)編號(hào)：Bio-129469
規(guī)格：1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
細(xì)胞信息：HOK-16B
細(xì)胞名稱：人口腔角質(zhì)細(xì)胞HOK-16B
產(chǎn)品規(guī)格：T25培養(yǎng)瓶x1；1.5ml凍存管x2
細(xì)胞數(shù)量：1x10^6
保存溫度：37℃；-198℃
運(yùn)輸方式：常溫保溫運(yùn)輸；干冰運(yùn)輸
安全等級(jí)：1
用途限制：僅供科研3類
培養(yǎng)體系：DMEM高糖培養(yǎng)基（Hyclone）+10%胎牛血清（Gibco）+1%雙抗（Hyclone）
簡(jiǎn)介：人口腔角質(zhì)細(xì)胞HOK-16B取自女性供體，貼壁培養(yǎng)。
注釋：Transformant:NCBI_TaxID;333760;Human papillomavirus type 16(HPV16).
用途：研究
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫(kù)為準(zhǔn)）
二、培養(yǎng)方式
1、培養(yǎng)基： HOK-16B 專用培養(yǎng)基【DMEM 高糖(HYCLONE SH30022.01 或 GIBCOC11965500BT）＋10%胎牛血清（GIBCO 10099-141）＋1% P/S，不含丙酮酸鈉】
2、培養(yǎng)環(huán)境：37℃、5%CO2
3、傳代培養(yǎng)：當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到 80%以上時(shí)，可以進(jìn)行傳代，傳代比例 1:2~1:4，1~2 天傳代一次。
（1）用巴氏滴管吸出細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基；
（2）加入 1ml 的 PBS，輕輕晃動(dòng)潤(rùn)洗細(xì)胞，然后將 PBS 吸出；
（3）加入 1ml 的胰酶，輕輕晃動(dòng)浸潤(rùn)細(xì)胞，然后放在培養(yǎng)箱內(nèi)消化 2-3 分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間）；
（4）在顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞變圓，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞便開(kāi)始脫落，這時(shí)可以終止消化；
（5）加入 4ml 含血清的完全培養(yǎng)基，用移液器吹打細(xì)胞，使細(xì)胞脫落并形成單細(xì)胞懸液；
（6）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到 15ml 的離心管，1000rpm 離心 5min；
（7）離心完成后吸出上清丟棄，再用移液管取 10ml 完全培養(yǎng)基將細(xì)胞重懸，輕輕吹打混勻；
（8）將細(xì)胞懸液分裝到兩個(gè)新的 T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，放在 37℃的 CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
4、細(xì)胞凍存：使用本公司無(wú)血清凍存液可直接將細(xì)胞凍存在-80℃（無(wú)需使用程序降溫盒），細(xì)胞在-80℃可保存 3 年，長(zhǎng)期保存建議使用液氮罐。
5、冷凍復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 5mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 4-6mL 完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入 6cm 皿中），培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
三、質(zhì)量檢測(cè)
1、細(xì)菌檢測(cè)：陰性
2、支原體檢測(cè)：陰性
四、售后服務(wù)
1、收到細(xì)胞后請(qǐng)及時(shí)查看瓶身有無(wú)破損，是否漏液等現(xiàn)象；
2、用 75%的酒精噴灑培養(yǎng)瓶之后，放在培養(yǎng)箱中靜置 2-4 小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后用顯微鏡觀察細(xì)胞狀態(tài)并拍照記錄，40 倍和 100 倍照片各一張（細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中存在少量的漂浮或者死亡屬于正?，F(xiàn)象）；
3、原瓶中的培養(yǎng)基在細(xì)胞傳代之后不建議繼續(xù)使用，請(qǐng)配制新的完全培養(yǎng)基或者購(gòu)買本公司的專用培養(yǎng)基；
4、建議定期對(duì)細(xì)胞進(jìn)行拍照記錄；收到細(xì)胞后 7 天內(nèi)，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)有任何問(wèn)題，可申請(qǐng)售后。
5、強(qiáng)烈建議：在第一次細(xì)胞傳代時(shí)，使用購(gòu)買本公司配置的細(xì)胞培養(yǎng)瓶將細(xì)胞按照 1:2 進(jìn)行傳代，可以對(duì)比測(cè)試自配的培養(yǎng)基是否可以養(yǎng)好細(xì)胞。如果有以上任何問(wèn)題，請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系本公司。
五、驗(yàn)收細(xì)胞注意事項(xiàng)
1、收到人口腔角質(zhì)細(xì)胞HOK-16B，請(qǐng)查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁，如有請(qǐng)盡快聯(lián)系。
2、收到人口腔角質(zhì)細(xì)胞HOK-16B，如包裝完好，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞。,由于運(yùn)輸過(guò)程中的問(wèn)題，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來(lái)，顯微鏡下觀察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況，出現(xiàn)此狀態(tài)時(shí)，請(qǐng)不要打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時(shí)左右，讓細(xì)胞先穩(wěn)定下，再于顯微鏡下觀察，此時(shí)多數(shù)細(xì)胞會(huì)重新貼附于瓶壁。如細(xì)胞仍不能貼壁，請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，如臺(tái)盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常請(qǐng)按懸浮細(xì)胞的方法處理。
3、收到人口腔角質(zhì)細(xì)胞HOK-16B后，請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞，用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞。若懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)離心收集細(xì)胞，接種到一個(gè)新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液，使用新鮮配制的培養(yǎng)基，使用進(jìn)口胎牛血清。剛接到細(xì)胞，若細(xì)胞不多時(shí)血清濃度可以加到15％去培養(yǎng)。若細(xì)胞迏到80%左右，血清濃度還是在10％。
4、收到人口腔角質(zhì)細(xì)胞HOK-16B時(shí)如無(wú)異常情況，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過(guò)80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出，留下5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)：超過(guò)80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
5、將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過(guò)的瓶子里，存放于4℃冰箱，以備不時(shí)之需。
6、24小時(shí)后，人口腔角質(zhì)細(xì)胞HOK-16B已恢復(fù)并貼滿瓶壁，即可傳代。（貼壁細(xì)胞）將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去，加3-5ml（以能覆蓋細(xì)胞生長(zhǎng)面為準(zhǔn)）PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化，消化時(shí)間以具體細(xì)胞為準(zhǔn)，一般1-3分鐘，不超過(guò)5分鐘?？梢苑湃?7℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動(dòng)瓶壁，見(jiàn)細(xì)胞脫落下來(lái)，加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之完全脫落，然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心，1000rpm/5min。棄上清，視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù)，一般一傳二，如細(xì)胞量多可一傳三，有些細(xì)胞不易傳得過(guò)稀，有些生長(zhǎng)較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶，以具體細(xì)胞和經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。（懸浮細(xì)胞）用移液管輕輕吹打瓶壁，直接將溶液吸入離心管離心即可。
7、貼壁細(xì)胞，懸浮細(xì)胞。嚴(yán)格無(wú)菌操作。換液時(shí)，換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液，37℃，5%CO2培養(yǎng)。
特別提醒：原瓶中培養(yǎng)基不宜繼續(xù)使用，請(qǐng)更換新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)。
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