一、背景
小鼠外周血單個核細胞采用密度梯度離心法結合差速貼壁法分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細胞，把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中首次提出外周血這一新概念。
單核細胞起源于骨髓中的造血干細胞，并在骨髓中發(fā)育。當它們從骨髓進入血液時仍然是尚未成熟的細胞。與其他血細胞比較，單核細胞內(nèi)含有更多的非特異性脂酶，并且具有更強的吞噬作用。單核細胞在血液中停留2-3天后遷移到周圍組織中，細胞體積繼續(xù)增大，直徑可達50-80μm，細胞內(nèi)所含的溶酶體顆粒和線粒體的數(shù)目也增多，成為成熟的細胞。
固定在組織中的單核細胞稱為組織巨噬細胞，它們經(jīng)常大量存在于淋巴結、肺泡壁、骨髓、肝和脾等器官。激活了的單核細胞和組織巨噬細胞能生成并釋放多種細胞毒、干擾素和白細胞介素，參與機體防衛(wèi)機制，還產(chǎn)生一些能促進內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞生長的因子。在炎癥周圍單核細胞能進行細胞分裂，并包圍異物。
二、應用
用于苯短期重復染毒對小鼠外周血單個核細胞及脾臟免疫功能的影響研究：
通過構建苯染毒小鼠模型,從免疫器官、免疫細胞和免疫分子等多個水平研究苯染毒對小鼠外周血單個核細胞及脾臟的免疫毒性,為進一步探究苯的免疫毒性效應及其作用機制提供實驗研究依據(jù)。
方法：
1、將40只6-8周齡的雄性無特定病原體級BALB/c小鼠隨機分為4組:對照組（玉米油）、低劑量組（50mg/kg）、中劑量組（150mg/kg）和高劑量組（500mg/kg）,每組10只。每天經(jīng)口灌胃1次,每周5天,連續(xù)4周。染毒期間每周觀察記錄小鼠體重變化,末次染毒24小時后進行各項指標的檢測。
2、采取小鼠的外周血進行血常規(guī)分析;使用酶聯(lián)免疫吸附試驗測定血漿中免疫球蛋白G、白介素-2和白介素-6的含量;使用Mito SOX熒光染料結合流式細胞術測定小鼠外周血單個核細胞線粒體ROS含量,使用ATP測定試劑盒和BCA蛋白測定試劑盒測定小鼠外周血單個核細胞ATP的含量;使用硫代巴比妥酸法測定丙二醛的含量、二硫代二硝基苯甲酸法測定谷胱甘肽過氧化物酶的活力、羥胺法測定總超氧化物歧化酶的活力。
3、無菌解剖小鼠,摘取脾臟并計算脾臟系數(shù),并對小鼠脾臟進行病理學檢查;使用TUNEL檢測試劑盒檢測脾臟細胞的凋亡情況;使用Cell Counting Kit-8試劑盒測定小鼠脾臟中T、B淋巴細胞增殖能力。
4、應用同位素標記相對和絕對定量技術分析比較高劑量組和對照組中小鼠的脾臟蛋白質(zhì)表達差異,利用Gene Ontology和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes數(shù)據(jù)庫對差異蛋白進行生物信息學分析,找出關鍵差異表達蛋白并應用Wes全自動蛋白定量分析系統(tǒng)和實時熒光定量PCR技術驗證差異蛋白及其相應的mRNA表達水平。
北京百歐博偉生物技術有限公司的微生物菌種查詢網(wǎng)提供微生物菌種保藏、測序、購買等服務,是中國微生物菌種保藏中心的服務平臺，并且是集微生物菌種、菌種,ATCC菌種、細胞、培養(yǎng)基為一體的大型微生物查詢類網(wǎng)站，自設設備及技術的微生物菌種保藏中心！歡迎廣大客戶來詢！