棘孢木霉是Trichoderma屬的微生物，原產(chǎn)地為中國。主要用途為研究；教學。
一、菌種簡介
平臺編號：Bio-66266
提供形式：凍干物
拉丁屬名：Trichoderma Asperellum
中文名稱：棘孢木霉
屬名：Trichoderma
種名加詞：asperellum
來源歷史：←黑龍江省輕工科學研究院(L109) ←中國微生物菌種查詢網(wǎng)
收藏時間：2007.3.5
資源歸類編碼：15151913121
模式菌株：非模式菌株
主要用途：研究；生產(chǎn)
具體用途：野生植物制酒。
特征特性：分生孢子梗有隔膜，垂直對生分枝，頂枝尖端細削，微彎，尖端生分生孢子團，含有孢子4-12個；分生孢子無色。
生物危害程度：四類
致病對象：無
培養(yǎng)基：蔗糖 30.0g，NaNO3 3.0g，MgSO4·7H2O 0.5g，KCl 0.5g，F(xiàn)eSO4·4H2O 0.01g，K2HPO4 1.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH6.0～6.5。
培養(yǎng)溫度：25-28℃
資源保藏類型：培養(yǎng)物
保存方法：真空冷凍干燥法
實物狀態(tài)：有實物
共享方式：公益性共享；資源純交易性共享；合作研究共享；資源交換性共享
用途：研究；生產(chǎn)；野生植物制酒。
注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準）
二、形態(tài)特征
棘孢木霉，落形成同心環(huán)，在同心環(huán)上產(chǎn)生稠密的分生孢子，接近中央的分生孢子暗綠色，邊緣的分生孢子才剛剛形成，氣生菌絲缺。分生孢子梗形成墊狀至半球形叢束，散布在整個菌落或聚集成2一3個同心圓環(huán)，暗綠色。菌落背面不變色。分生孢子梗細長、彎曲，次級分枝對生。瓶梗安瓶形，3個或更多個一組輪生。分生孢子球形、近球形，壁有細刺。
三、微生物菌種的培養(yǎng)
1、孢子制備
⑴ 放線菌孢子的制備
一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營養(yǎng)成分,如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1%,氮源不超過0.5%),碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境,不利于放線菌孢子的形成,氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下,干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃,少數(shù)為37 ℃,培養(yǎng)時間為5~14天。
⑵ 產(chǎn)品僅限用于科研霉菌孢子的制備
霉菌的孢子培養(yǎng),一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖,而且這類培養(yǎng)基的表面積較大,可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25~28 ℃,培養(yǎng)時間為4~14天。
2、種子制備
⑴ 搖瓶種子制備
搖瓶種子進罐,常采用母瓶、子瓶兩級培養(yǎng),有時母瓶種子也可以直接進罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和完全,并易被菌體分解利用,氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃,子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高,更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。
⑵ 種子罐種子制備
種子罐種子制備的工藝過程,因菌種不同而異,一般可分為一級種子、二級種子和三級種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中,經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲,這樣的種子稱為一級種子,把一級種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,稱為二級發(fā)酵。如果將一級種子接入體積較大的種子罐內(nèi),經(jīng)過培養(yǎng)形成更多的菌絲,這樣制備的種子稱為二級種子,將二級種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,稱為三級發(fā)酵。同樣道理,使用三級種子的發(fā)酵,稱為四級發(fā)酵。
四、保藏條件
斜面菌種和安瓿瓶凍干菌種應在 2-8°C 保存。西林瓶菌種請置于-20°C 保存。甘油請置于-80°C。
五、注意事項
1）凍干首次活化，干粉要全部用完，不能預留，用無菌吸管吸取 0.3ml 的培養(yǎng)液（即以上建議的培養(yǎng)基配方，不加瓊脂）或者無菌水，滴入凍干管中，輕輕振蕩至其溶解。吸取全部菌懸液，接種在培養(yǎng)基上（建議不超過 2 支斜面或平板；或直接接種液體培養(yǎng)基）； 經(jīng)過冷凍干燥保藏，菌種處于休眠狀態(tài)，復蘇培養(yǎng)時可能會延遲生長，這時需較長的培養(yǎng)時間； 若您收到的是已復蘇的培養(yǎng)物（非凍干菌），則可以直接用于您的實驗，或根據(jù)需要轉(zhuǎn)接培養(yǎng)；如有不明白之處，請務必先咨詢我單位技術人員，避免不必要的損失；二次接種量要多，固體斜面培養(yǎng)基水分要少才能讓菌體長得比較明顯，液體培養(yǎng)要靜止培養(yǎng)；
2）經(jīng)過冷凍干燥保藏，菌種處于休眠狀態(tài)，復蘇培養(yǎng)時可能會延遲生長，這時需較長的培養(yǎng)時間；若您收到的是已復蘇的培養(yǎng)物（非凍干菌），則可以直接用于您的實驗，或根據(jù)需要轉(zhuǎn)接培養(yǎng)如有不明白之處，請務必先咨詢我單位技術人員，避免不必要的損失；
3）微生物菌種應保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時間過長會導致菌種衰退；
4）菌種操作應在無菌條件下進行；轉(zhuǎn)種完畢，應經(jīng)滅菌再做丟棄處理；
5）應根據(jù)菌種狀況及時轉(zhuǎn)接，凍干菌種保藏時間通常為 2-25 年；
6）菌種使用過程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降，應及時和微生物菌種查詢網(wǎng)聯(lián)系。
7）如若有菌種復蘇不活或者污染等情況，請在收到菌鐘后 2 個月內(nèi)聯(lián)系，逾期不予受理；
8）打管操作需由專業(yè)微生物技術人員在相應的防護設備中進行，生物危害程度為三類的菌種應在生物安全柜中操作，打管時凍干管應遠離面部，保護眼睛。
9）安瓿瓶開封：用浸過 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3 滴）無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端并將凍干管開口處在火焰上過一遍，并保持在火焰旁操作。
10）甘油管使用：使用本甘油菌時可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或進行液體培養(yǎng)即可。也可以完全融解后使用，但隨著凍融次數(shù)的增加，細菌的活力會逐漸下降。
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