一、背景
CAL-62人甲狀腺癌貼壁細(xì)胞系是1988年從一名患有甲狀腺間變性癌的70歲女性的甲狀腺（右葉）建立;被描述為在異種移植裸鼠中致瘤。
二、CAL-62人甲狀腺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞培養(yǎng)操作
1）復(fù)蘇CAL-62人甲狀腺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞：將含有1mL CAL-62人甲狀腺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有CAL-62人甲狀腺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查CAL-62人甲狀腺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞密度。
2）CAL-62人甲狀腺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞傳代：如果CAL-62人甲狀腺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗CAL-62人甲狀腺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞1-2次。
2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將CAL-62人甲狀腺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞懸液按1：2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）CAL-62人甲狀腺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
下面T25瓶為類；
1、CAL-62人甲狀腺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2、4 min 1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸CAL-62人甲狀腺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞，根據(jù)CAL-62人甲狀腺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
3、將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
三、應(yīng)用
CAL-62人甲狀腺癌貼壁細(xì)胞系可以用于甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度測定及其臨床意義：
以甲狀腺乳頭狀癌患者手術(shù)切除標(biāo)本為研究材料，在體外對(duì)甲狀腺癌細(xì)胞進(jìn)行TSH(牛TSH)活化，通過酶聯(lián)免疫法檢測活化后甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞中cAMP濃度，同時(shí)選取結(jié)節(jié)性甲狀腺腫患者的甲狀腺細(xì)胞為對(duì)照，以評(píng)估甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞的促甲狀腺激素受體活性水平，為甲狀腺乳頭狀癌術(shù)后進(jìn)行內(nèi)分泌治療的個(gè)體化實(shí)施提供參考依據(jù)。
方法：共選取2013年1月-2013年6月收治的44例甲狀腺乳頭狀癌患者手術(shù)切除的組織標(biāo)本為觀察組研究對(duì)象，另選取同時(shí)期收治44例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫患者手術(shù)切除的組織標(biāo)本為對(duì)照組研究對(duì)象。
對(duì)每一例標(biāo)本經(jīng)兩位以上病理科醫(yī)師確認(rèn)。用ELISA測定試劑盒進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)cAMP測定。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(值)，計(jì)算樣品濃度，比較兩組組織中cAMP濃度。
結(jié)果：
1、甲狀腺乳頭狀癌及結(jié)節(jié)性甲狀腺腫細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)觀察甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞在24孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)24小時(shí)后，開始貼壁，貼壁細(xì)胞大部分為圓形、橢圓形或梭形；3-4天后，細(xì)胞連接成片或聚集成團(tuán)，以不規(guī)則形為主；5-7天后，細(xì)胞逐漸向四周擴(kuò)展貼壁生長，以單層生長，逐漸鋪滿培養(yǎng)孔底，此時(shí)，細(xì)胞為上皮樣，多為圓形、橢圓形或梭形，細(xì)胞質(zhì)濃，內(nèi)有豐富的顆粒物質(zhì)，細(xì)胞核位于細(xì)胞一側(cè)，可見核仁。結(jié)節(jié)性甲狀腺腫細(xì)胞在24孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)24小時(shí)后，同樣開始貼壁，貼壁細(xì)胞大部分為圓形或橢圓形細(xì)胞；4-5天后，細(xì)胞連接成片；7-10天后，細(xì)胞逐漸鋪滿培養(yǎng)孔底，多為圓形、橢圓形或梭形，細(xì)胞質(zhì)較淡，顆粒物質(zhì)含量較少，細(xì)胞中可見細(xì)胞核。
2、甲狀腺乳頭狀癌及結(jié)節(jié)性甲狀腺腫細(xì)胞cAMP測定比較根據(jù)測定結(jié)果，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，線性方程為Y=0.0036*X-0.0493，R2=0.9665，提示相關(guān)性良好。計(jì)算的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為X(cAMP濃度)=277.7778*Y+13.6944。根據(jù)以上方程計(jì)算所得，甲狀腺乳頭狀癌組培養(yǎng)所得細(xì)胞cAMP濃度為(64.8337±7.8349)pmol/ml，結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組培養(yǎng)所得細(xì)胞cAMP濃度為(72.7295±8.6754)pmol/ml，甲狀腺乳頭狀癌組培養(yǎng)所得細(xì)胞cAMP濃度低于結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.4804，P=0.0000<0.05)。
結(jié)論：
1、甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞cAMP水平低于結(jié)節(jié)性甲狀腺腫細(xì)胞，由此推測可能甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞促甲狀腺激素受體功能低于結(jié)節(jié)性甲狀腺腫細(xì)胞。
2、甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度在不同個(gè)體間存在差異。
3、甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度測定可做為甲狀腺乳頭狀癌術(shù)后個(gè)體化內(nèi)分泌治療的參考依據(jù)。
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