一、背景
雜交瘤細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基是化學(xué)成分明確、使用中不需添加血清的培養(yǎng)基，用于雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，以獲取特定的單克隆抗體。使用雜交瘤細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基可簡(jiǎn)化后期蛋白純化的環(huán)節(jié)，獲得高表達(dá)量的單克隆抗體。
無(wú)血清培養(yǎng)基和試劑被廣泛的應(yīng)用于培養(yǎng)哺乳動(dòng)物和無(wú)脊椎動(dòng)物細(xì)胞以制備單克隆抗體，病毒抗原和重組蛋白等。大多數(shù)的無(wú)血清培養(yǎng)基含有向細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)離子的轉(zhuǎn)鐵蛋白和調(diào)節(jié)葡萄糖攝取量的胰島素，以及一些蛋白質(zhì)和清蛋白，纖維蛋白，胎球蛋白等，這些蛋白在細(xì)胞培養(yǎng)中發(fā)揮各種不同的功能，如提供細(xì)胞貼壁所需的基質(zhì)，抗生物反應(yīng)器剪切力，作為脂質(zhì)和其他生長(zhǎng)分化因子的載體等。
雜交瘤細(xì)胞是一種能分泌單一獨(dú)特抗體的無(wú)限傳代細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞技術(shù)首先由英國(guó)的Kohler和Mistein在1975年通過(guò)小鼠骨髓瘤細(xì)胞和小鼠脾細(xì)胞融合而建立的。雜交瘤細(xì)胞所分泌的單克隆抗體在診斷、免疫、純化、疫苗生產(chǎn)、治療和基礎(chǔ)研究等方面有著廣泛的應(yīng)用，已成為生物工程方面的重要產(chǎn)品。
雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)通常是在有血清培養(yǎng)基中進(jìn)行的，雖然細(xì)胞密度和產(chǎn)物的濃度均較高，但由于血清中蛋白和其它大分子物質(zhì)太復(fù)雜，影響了單克隆抗體的分離和純化，使單克隆抗體的收率和純度降低，限制了單克隆抗體的體內(nèi)應(yīng)用；同時(shí)，由于血清的添加也使生產(chǎn)成本大大提高。因此，許多科研工作者致力于開(kāi)發(fā)無(wú)血清或低血清培養(yǎng)基。
二、應(yīng)用
用于兔骨髓瘤細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)馴化研究：
針對(duì)兔單抗制備的工程細(xì)胞株,包括兔骨髓瘤細(xì)胞株和融合后的雜交瘤細(xì)胞株,開(kāi)展無(wú)血清培養(yǎng)馴化,以去除培養(yǎng)基中血清成分。
首先,選取四種不同種類的無(wú)血清培養(yǎng)基對(duì)兔骨髓瘤細(xì)胞株(240E-W2)進(jìn)行無(wú)血清馴化培養(yǎng),比較分析直接替換的速降方式和逐步替換的緩降方式,探討不同馴化方式和不同的培養(yǎng)基的影響。
發(fā)現(xiàn)1640AB培養(yǎng)基和CD Hybridoma Medium培養(yǎng)基按1:1配比,以緩降培養(yǎng)基內(nèi)血清含量的方式,在貼壁培養(yǎng)的環(huán)境下從9%血清含量降至1%,經(jīng)72h培養(yǎng)后細(xì)胞密度達(dá)4.0-5.0×105個(gè)/ml。
其次,進(jìn)行無(wú)血清懸浮培養(yǎng)馴化,提高初始接種密度為1.2×105個(gè)/ml,在懸浮培養(yǎng)條件下從1%血清含量成功降至0,經(jīng)過(guò)72h培養(yǎng)后細(xì)胞密度可達(dá)4.0-6.0X 105個(gè)/ml,細(xì)胞狀態(tài)良好。
對(duì)細(xì)胞株進(jìn)行多次亞克隆,挑選出最穩(wěn)定的適應(yīng)于無(wú)血清培養(yǎng)的兔骨髓瘤細(xì)胞株(240E-W2-SFM),建庫(kù)保持。進(jìn)一步篩選無(wú)血清凍存液,進(jìn)行凍存復(fù)蘇測(cè)試,以確保無(wú)血清凍存方式對(duì)細(xì)胞的生理活性沒(méi)有負(fù)面影響。
最后,完全適應(yīng)于無(wú)血清懸浮培養(yǎng)的兔骨髓瘤細(xì)胞株(240E-W2-SFM)與兔脾臟細(xì)胞進(jìn)行融合,構(gòu)建雜交瘤細(xì)胞株,進(jìn)行常規(guī)9%血清濃度培養(yǎng)和無(wú)血清同步維護(hù)對(duì)比,考察酶聯(lián)免疫吸附陽(yáng)性率,蛋白免疫印跡法陽(yáng)性率、丟失率等,比較分析無(wú)血清培養(yǎng)對(duì)于雜交瘤細(xì)胞株的影響。
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