一、背景
人腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞又稱為腎胚胎瘤、Vilms腫瘤，是目前小兒泌尿生殖系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤，大多數(shù)發(fā)生于小兒，個(gè)別情況下也有成人或者老年人發(fā)生，通常該病跟遺傳可能具有一定的聯(lián)系，也有一些散發(fā)的病例。腎母細(xì)胞瘤通常有可能和一些臨床綜合征相伴發(fā)，這種情況下通常需要針對(duì)腎母細(xì)胞瘤完善超聲、CT等影像學(xué)檢查。大多數(shù)腫瘤起源于后腎母細(xì)胞，比較常見于單側(cè)腎臟多發(fā)，5%-10%的患者累及雙側(cè)腎臟。
從胚胎學(xué)上來說，持續(xù)存在的后腎胚基未能分化為腎小球及腎小管并呈不正常的增殖、發(fā)展為腎母細(xì)胞瘤。腫瘤可以遺傳的形式或非遺傳的形式出現(xiàn)。若屬于遺傳形式，則腫瘤發(fā)生得更早，更易為雙側(cè)性及多中心形式。所有雙側(cè)性腎母細(xì)胞瘤及１５％～２０％單側(cè)病變與遺傳有關(guān)，但Belasc０等的病因復(fù)習(xí)中，遺傳因素并不重要，僅１％～２％的患者有家族史。
腫瘤體積大，灰白色，瘤組織常突破腎被膜侵及腎周圍脂肪組織，甚至擴(kuò)散至腸系膜根部。切面隆起，實(shí)性或囊性，色彩多樣，與腫瘤的成分有關(guān)。部分質(zhì)硬，灰白色，部分質(zhì)軟，粘液樣，部分可見透明軟骨樣組織，并有鈣化、出血和壞死灶。鏡下，腫瘤組織有三種成分：未分化的腎母細(xì)胞（nephroblastic cells），體積小，呈梭形，胞漿少，核染色深，肉瘤樣，彌漫分布；在彌漫性分布的未分化梭形細(xì)胞中，可見由腎母細(xì)胞分化而來的未成熟的腎小球和腎小管樣結(jié)構(gòu)；不同分化程度的橫紋肌及平滑肌、膠原纖維、軟骨、骨和脂肪組織等間葉組織（mesenchymal tissues），這些間葉組織的分化程度與預(yù)后密切相關(guān)。
根據(jù)腫瘤所含成分比例的不同，可分為三型，未分化腎母細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)的為腎母細(xì)胞型（nephroblastic type）；腎小球和腎小管樣結(jié)構(gòu)占優(yōu)勢(shì)的為上皮型（epitheloid type）；橫紋肌等間葉組織占優(yōu)勢(shì)的為間葉型（mesenchymal type）。
腎母細(xì)胞瘤臨床表現(xiàn)為偶然發(fā)現(xiàn)的腹部腫塊，偶有腹痛、血尿和高血壓，一部分患者可以出現(xiàn)惡心、嘔吐等胃腸道癥狀，甚至出現(xiàn)一些急腹癥的表現(xiàn)，因此在臨床上應(yīng)予以重視。這是一種惡性實(shí)體腫瘤，其對(duì)于放療、化療、手術(shù)治療相對(duì)來說效果比較好。
二、應(yīng)用
人腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞可以用于miR-200c及其靶基因EP300參與腎母細(xì)胞瘤增殖與侵襲的分子機(jī)制：
從腎母細(xì)胞瘤組織和細(xì)胞miRNA芯片中篩選出miR-200c作為腎母細(xì)胞瘤候選miRNA,探討miR-200c在腎母細(xì)胞瘤增殖和侵襲中的作用機(jī)制,主要內(nèi)容:(1)篩選并驗(yàn)證腎母細(xì)胞瘤增殖和侵襲相關(guān)的miRNA;(2)預(yù)測(cè)并鑒定miR-200c的靶基因,明確miR-200c通過靶基因在腎母細(xì)胞瘤增殖和侵襲中發(fā)揮的作用;(3)確定miR-200c靶基因EP300的信號(hào)通路,探討PI3K/AKT/FOXO通路在腎母細(xì)胞瘤增殖和侵襲中的作用。
研究方法：
1、腎母細(xì)胞瘤組織和細(xì)胞中miRNAs篩選及驗(yàn)證。
2、mR200c靶基因的預(yù)測(cè)和鑒定。
3、miR-200c對(duì)腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。
4、miR-200c參與的腎母細(xì)胞瘤信號(hào)通路的檢測(cè)。
研究結(jié)果：
1、腎母細(xì)胞瘤增殖和侵襲相關(guān)miRNA的篩選及鑒定(1)送檢6張miRNA芯片結(jié)果表明,與瘤旁腎組織相比,在腎母細(xì)胞瘤組中共篩選出27個(gè)表達(dá)均下調(diào)的miRNA,其中包括miR-200c。(2)利用熒光定量PCR檢測(cè)24例配對(duì)新鮮腎母細(xì)胞瘤組織及在2株腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞中miR-200c的表達(dá),miR-200c在腎母細(xì)胞瘤組織中的表達(dá)顯著低于瘤旁腎組織,2株瘤細(xì)胞低于正常胚胎腎293T細(xì)胞,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2、miR-200c靶基因的預(yù)測(cè)及鑒定(1)通過四個(gè)常用在線預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)與miR-200c相互作用的靶基因,結(jié)果顯示EP300與增殖和侵襲相關(guān),因此假設(shè)EP300作為miR-200c的靶基因。(2)采用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)表明miR-200c能夠與EP300 3’UTR結(jié)合,從而抑制熒光素酶的活性。(3)熒光定量PCR和Western blot結(jié)果表明miR-200c及其靶基因EP300的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)。
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