一、背景
HOP-92人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系是一種人類小細(xì)胞肺癌的體外細(xì)胞模型，用于研究該疾病的發(fā)生、發(fā)展和治療。該細(xì)胞系是由美國國立衛(wèi)生研究院(NIH)建立的，是從一名患有小細(xì)胞肺癌的患者身上獲取的腫瘤組織進行培養(yǎng)而得到的。
HOP-92人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系在形態(tài)學(xué)上表現(xiàn)為多邊形或長方形，具有高度的異質(zhì)性和增殖能力。它們表達(dá)多種與小細(xì)胞肺癌相關(guān)的分子標(biāo)志物，如神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1(TTF-1)等。此外，HOP-92細(xì)胞系還表現(xiàn)出對多種化療藥物和靶向藥物的不同敏感性，這為臨床治療提供了重要的參考依據(jù)。
HOP-92人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于小細(xì)胞肺癌的基礎(chǔ)研究和藥物篩選等領(lǐng)域。研究人員可以通過對該細(xì)胞系的研究來探索小細(xì)胞肺癌的發(fā)生機制、尋找新的治療靶點以及評估新藥物的療效和安全性等。
二、HOP-92人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系培養(yǎng)方法
1、HOP-92人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、HOP-92人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、HOP-92人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
三、應(yīng)用
HOP-92人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系可以用于miR-542-5p在非小細(xì)胞肺癌中的臨床意義及初步機制研究：
miR-542-5p潛在靶基因網(wǎng)絡(luò)生物信息學(xué)分析
1、通過12個預(yù)測軟件預(yù)測出57233個miR-542-5p預(yù)測靶基因,按至少同時出現(xiàn)在六個軟件預(yù)測為條件,篩選出452個靶基因。
2、DAVID軟件測出miR-542-5p預(yù)測的GO分析結(jié)果中,生物過程GO分析(GOTERM BP FAT)中有147條通路信息,其中最顯著的前三條通路如下：RNA聚合酶引物調(diào)控的轉(zhuǎn)錄通路(regulation of transcription from RNA polymerase II promoter；GO:0006357,P=0.002)；蛋白質(zhì)定位通路(protein localization；GO:0008104,P=0.002)；Wnt受體信號通路(Wnt receptor signaling pathway；GO:0016055,P=0.002).細(xì)胞組成GO分析(GOTERM CC FAT)中有15條,其中排前三條通路如下：神經(jīng)元投射通路(neuron projection；GO:0043005,P=0.003)；突觸調(diào)控通路(synapse；GO:0045202,P<0.001):體元投射(cell projection；GO:0042995,P<0.001).分子功能GO分析(GOTERM MF FAT)中有37條,其中三條最顯著通路如下：蛋白質(zhì)糖基綁定(protein C-terminus binding；GO:0008022,P=0.003):轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性(transcription regulator activity:GO:0030528,P=0.017)；蛋白質(zhì)自聯(lián)(protein self-association；GO:0043621,P=0.037).
3、DAVID軟件測出miR-542.5p參與的KEGG通路分析13條通路信息,其中三條最顯著為：卵母細(xì)胞成熟分裂調(diào)控通路(Oocyte meiosis；hsa04114,P=0.01):擴張性心肌病調(diào)控通路(Dilated cardiomyopathy；hsa05414,P=0.012):黑素原生成調(diào)控通路(Melanogenesis；hsa04916,P=0.018).
4、DAVID軟件測出miR-542-5p參與的PANTHER通路分析有12條通路信息,其中參與的最顯著三條通路為：GABA.BⅡ受體信號(GABA-BreceptorⅡsignaling;P05731,P=0.001);谷氨酸受體組第三途徑(Metabotropic glutamate receptor groupⅢpathway;P00039,P=0.013);胰島素／胰島素樣生長因子通路蛋白激酶B信號級聯(lián)(Insulin/IGF pathway-protein kinase B signaling cascade;P00033,P=0.024)。
5、452個靶基因在String上分析結(jié)果顯示：GO分析中miR-542-5p參與的生物過程通路(GOTERM BP FAT)中有121有意義的作用結(jié)果(P<0.05),其中參與的前三條依次為神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)展(nervous system development)(GO:0007399),神經(jīng)(nervous)(GO:0022008),細(xì)胞分化(cell differentiation)(GO:0030154);細(xì)胞組成通路(GOTERM CC FAT)中有20條有意義的作用結(jié)果(P<0.05),其中參與的前三條依次為細(xì)胞反射(cell projection)(GO:0042995),神經(jīng)反射(neuron projection)(GO:0043005),神經(jīng)系統(tǒng)的部分(neuron part)(GO:0097458);分子功能通路(GOTERM MF FAT)中僅參與蛋白綁定(protein blind)(GO:0005515)的作用(P<0.05)。KEGG通路中有7條作用結(jié)果,其中參與的前三條依次為嗎啡慢性中毒(Morphine addiction);可卡因成癮(Cocaine addiction),心肌細(xì)胞的腎上腺素信號通路(Adrenergic signaling in cardiomyocytes)(P<0.05)。并通過網(wǎng)絡(luò)分析及網(wǎng)站評分信息檢測出21個hub gene,分別為RMT8,ADAMTS8,MASP1,HOXC9,ARTN,NPDC1,CASC3,NCDN,ARPC4,PGPEP1,TNNI3K,SLC24A3,EPS8L2,FARSA,PDDC1,PLEKHM1,UNKL,PRDM9,ISYNA,BCL2L1。
6、通過將靶基因注釋在NCI-60 cell lines不同癌癥細(xì)胞系中的表達(dá)圖譜,顯示出多個靶基因在HOP-92人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系,HOP62;NCI-H226;NCI-H23;NCI-H322;NCI-460及EKVX肺癌細(xì)胞系中高表達(dá),依次為NSD1,ELF4,HOXA9,ABL1,ABL2,NOTCH1,TCF3,SEPT6,NUP214,CRTC1。
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