一、背景
人胃腺癌細胞(低分化)源自一位62歲的胃癌（未分化腺癌）患者，表達CEA。STR檢測發(fā)現該細胞被HeLa細胞污染。
胃低分化腺癌是胃癌當中的一種，胃癌根據細胞核分裂程度，可以分為高分化、中分化、低分化。低分化代表胃癌細胞分化程度比較差，分化潛能比較大。低分化的癌腫瘤惡性程度高，生長快，容易發(fā)生轉移。進行治療時，或在進行腫瘤危險因素評估時，低分化的腫瘤出現復發(fā)轉移的風險相對高，高分化癌細胞已經具有可塑性已經成型，惡性程度相對比較低。如果檢測是低分化胃癌，其危險分期較高。
二、人胃腺癌細胞(低分化)培養(yǎng)操作
1)復蘇人胃腺癌細胞(低分化)：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主。
將含有1 mL人胃腺癌細胞(低分化)懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將人胃腺癌細胞(低分化)懸液加入6 cm平皿中，加入約4 mL完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第三天換液并檢查細胞密度。
2)人人胃腺癌細胞(低分化)傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗人多發(fā)性骨髓瘤細胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-3min（視細胞消化情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
c、將人胃腺癌細胞(低分化)懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3)人胃腺癌細胞(低分化)凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。
下面T25瓶為例；
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。
b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
三、應用
人胃腺癌細胞(低分化)可以用于二烯丙基二硫抑制人胃低分化腺癌增殖的轉錄組學研究：
二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)可以抑制多種腫瘤細胞增殖,但具體作用機制尚未完全闡明。本研究旨在構建DADS處理胃癌MGC803細胞差異表達基因表達譜、差異轉錄因子活性譜、差異microRNA,研究DADS抑制人胃癌MGC803細胞增殖的分子機制。
方法：通過人全基因組寡核苷酸微陣列芯片、轉錄因子活性譜芯片、microRNA芯片檢測DADS作用于MGC803細胞后差異基因的表達譜;Real-time PCR驗證MMP9、TIMP3,Real-time PCR驗證miR-222、miR-665。
結果：
1、系統(tǒng)構建了DADS處理胃癌MGC803細胞差異基因表達譜,表達相差1.5倍以上為差異具有顯著性。與對照組相比,處理組上調基因1293個(>2.0基因384個),下調基因1228個(>2.0基因202個)。利用dchip軟件以t test,P<0.001水平篩選數據。結果顯示,處理組MGC803細胞和未處理組明確表達2521個基因,其中,292個在處理組中明確表達,而未處理組表達下調,116個在未處理組明確表達,而處理組表達下調。Hierarchical Clustering分析顯示,處理組和未處理組在全基因表達譜上存在明顯差異。差異表達基因能夠區(qū)分處理組和未處理組。通過Real-time PCR證實了MMP9和TIMP3基因在處理前后的表達情況,提示這兩個基因可能是DADS抑制胃癌侵襲轉移的分子標記。
2、差異表達基因的功能分類,通過多種生物信息學軟件對基因芯片數據基因綜合分析,系統(tǒng)評價了差異表達基因的功能分類。Panther軟件分析發(fā)現上調基因共參與152條pathway,61條pathway的實際參與基因數量超過預期基因值,而“Angiogenesis”、“Integrin signalling pathway”和“Oxidative stress response”3條pathway的P<0.05。下調基因共參與41條pathway,其中41條pathway超過了預期基因數,但P>0.05。上調基因共參與229個BP分類,106個BP分類中實際參與基因數超過預期基因數,“Signal transduction”、“Cell structure and motility”、“Cell proliferation and differentiation”、“Cell cycle control”等17個BP分類的P<0.05。下調基因共參與109個BP分類,92個分類超過預期基因數,只有“Lactation,mamary development”分類的P<0.05。上調基因共參與254個MF分類,99個分類超過預期基因數,“Actin binding cytoskeletal protein”、“Cytoskeletal protein”、“Signaling molecule”和“Extracellular matrix”4個分類的P<0.05。下調基因共參與103個MF分類,其中95個分類超過預期基因數,但P>0.05。
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