一、背景
禽腺病毒PCR試劑盒是一種用于檢測(cè)禽腺病毒的生物試劑，采用PCR技術(shù)，可以快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)禽腺病毒。
禽腺病毒PCR試劑盒通常包含PCR反應(yīng)液、酶、引物等成分，其中PCR反應(yīng)液是核心成分，包含DNA模板、引物、dNTP等。在PCR反應(yīng)中，酶催化DNA合成，引物引導(dǎo)DNA鏈的延伸，dNTP提供合成DNA所需的原料。通過PCR反應(yīng)，可以快速擴(kuò)增DNA片段，從而達(dá)到檢測(cè)的目的。
禽腺病毒PCR試劑盒具有高靈敏度、高特異性、高重復(fù)性等特點(diǎn)，可以快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)禽腺病毒，為禽病防控提供有力的支持。同時(shí)，該試劑盒操作簡(jiǎn)便，易于使用，適用于專業(yè)實(shí)驗(yàn)室和基層單位的使用。
禽腺病毒是禽類中的一種病毒，主要引起禽類腺體的病變和功能障礙。該病毒具有不同的基因型，可引起禽類不同的臨床癥狀和病理變化。其中，一些基因型可引起雞的包涵體肝炎和心包積水綜合征等疾病，這些疾病的發(fā)生率較高，對(duì)禽類健康和生產(chǎn)造成嚴(yán)重影響。
禽腺病毒主要通過呼吸道、消化道等途徑傳播，在禽群中可引起大規(guī)模的感染。預(yù)防和控制禽腺病毒感染主要采取疫苗接種、加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和衛(wèi)生消毒等措施。
禽腺病毒PCR試劑盒的檢測(cè)原理是采用PCR技術(shù)，針對(duì)禽腺病毒的基因高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物，在PCR反應(yīng)體系中含禽腺病毒核酸模板的情況下，利用PCR技術(shù)對(duì)禽腺病毒的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)。在反應(yīng)過程中，引物引導(dǎo)DNA鏈的延伸，經(jīng)過數(shù)輪循環(huán)擴(kuò)增后，特異性擴(kuò)增片段得以擴(kuò)增。通過瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)，依據(jù)特異性擴(kuò)增片段的結(jié)果，判斷待檢樣品中是否含有豬細(xì)小病毒源性成分，實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的定性分析。
二、應(yīng)用
禽腺病毒PCR試劑盒可以用于血清4型禽腺病毒廣西分離株全基因組測(cè)序分析、檢測(cè)方法和致病性研究：
從Gen Bank下載FAdV-4變異株和非變異株的核苷酸序列,結(jié)合利用Primer Explorer V5和Premier 5.0引物設(shè)計(jì)軟件,設(shè)計(jì)篩選了兩套環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)引物和2條分子信標(biāo)探針,對(duì)反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度、引物濃度等進(jìn)行優(yōu)化,使用禽腺病毒PCR試劑盒建立了鑒別診斷FAdV-4變異株和非變異株的二重?zé)晒釲AMP檢測(cè)方法。該法特異性好,在520 nm和670 nm雙熒光通道下,對(duì)FAdV-4變異株、非變異株的擴(kuò)增結(jié)果分別為綠色和紅色,對(duì)FAdV-4變異株和非變異株混合感染樣品的擴(kuò)增結(jié)果為黃色,而對(duì)FAdV其它血清型、新城疫病毒、禽呼腸孤病毒等毒菌株的檢測(cè)結(jié)果均為陰性;靈敏度高,檢測(cè)下限為100 copies/μL;干擾性小,高濃度模板不影響低濃度模板的擴(kuò)增。
使用禽腺病毒PCR試劑盒建立的二重?zé)晒釲AMP檢測(cè)方法可區(qū)分FAdV-4變異株、非變異株和二者混合感染。為了解FAdV-4廣西分離株的致病性,以不同劑量和途徑感染SPF雞。以不同劑量肌肉注射感染4周齡SPF雞,記錄每組發(fā)病和死亡情況;以101.5TCID50劑量通過肌肉注射和口服途徑感染SPF雞,剖檢觀察病變,并采集組織樣品和棉拭子樣品,通過熒光定量PCR方法檢測(cè)病毒載量,通過組織切片觀察病理學(xué)變化。
結(jié)果顯示,劑量為107～103TCID50,可造成雞100%死亡;劑量為102TCID50、10 TCID50和1 TCID50,死亡率分別為90%、30%和10%。肌肉注射比口服方式更易感,剖檢發(fā)現(xiàn)明顯的心包積液和肝臟腫脹發(fā)黃。肝臟出現(xiàn)廣泛性的細(xì)胞變性壞死和核內(nèi)包涵體,脾臟、法氏囊和胸腺三個(gè)免疫器官出現(xiàn)了廣泛的淋巴細(xì)胞變性壞死。FAdV-4侵害肝臟、心臟等組織,主要的靶器官是肝臟,感染FAdV-4的雞可通過咽喉和泄殖腔進(jìn)行排毒。使用禽腺病毒PCR試劑盒建立的二重?zé)晒釲AMP檢測(cè)方法對(duì)6株FAdV-4廣西分離株進(jìn)行了全基因組測(cè)序,并與國(guó)內(nèi)外FAdV-4毒株序列進(jìn)行比較分析,掌握了FAdV-4廣西分離株的序列信息和變異情況。通過設(shè)計(jì)篩選兩套LAMP引物,優(yōu)化反應(yīng)條件,建立了鑒別診斷FAdV-4變異株和非變異株的使用禽腺病毒PCR試劑盒建立的二重?zé)晒釲AMP檢測(cè)方法。以不同的劑量和途徑感染SPF雞,結(jié)果發(fā)現(xiàn)FAdV-4對(duì)4周齡SPF雞致病性強(qiáng),肌肉注射方式更易感,組織嗜性廣泛,主要的靶器官是肝臟,可通過泄殖腔和咽喉排毒。
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