一、背景
SNU-182人肝癌貼壁細(xì)胞系是一種常用的細(xì)胞系，屬于肝癌細(xì)胞的一種，常用于肝癌研究和治療等方面。以下是關(guān)于SNU-182人肝癌貼壁細(xì)胞系的簡(jiǎn)要介紹：
SNU-182人肝癌貼壁細(xì)胞系起源和特性：SNU-182人肝癌貼壁細(xì)胞系是由一名24歲的亞洲男性患者的肝組織中分離出來的。該細(xì)胞系具有單個(gè)細(xì)胞核，可以通過Southern blot檢測(cè)到乙型肝炎病毒（HBV）DNA，但不表達(dá)乙肝病毒基因組RNA。
培養(yǎng)條件：SNU-182人肝癌貼壁細(xì)胞系通常在RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)，并添加10%胎牛血清和1%雙抗（青霉素和鏈霉素）。培養(yǎng)環(huán)境的氣相為100%空氣，溫度為37℃，屬于貼壁生長(zhǎng)型細(xì)胞。
SNU-182人肝癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞形態(tài)和用途：SNU-182人肝癌貼壁細(xì)胞系呈上皮細(xì)胞樣，形態(tài)較規(guī)則，具有一個(gè)清晰的核和胞質(zhì)。該細(xì)胞系可用于研究肝癌的發(fā)生機(jī)制、細(xì)胞增殖和凋亡、藥物篩選和新藥開發(fā)等方面。
二、SNU-182人肝癌貼壁細(xì)胞系培養(yǎng)步驟
1）復(fù)蘇SNU-182人肝癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）SNU-182人肝癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
3）SNU-182人肝癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。棄培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，進(jìn)行離心收集，1000RPM條件下離心8-10分鐘，去除上清，按凍存數(shù)量加入到凍存液中。
三、應(yīng)用
SNU-182人肝癌貼壁細(xì)胞系可以用于ZNF545在肝癌中的表觀遺傳學(xué)改變及功能的研究：
探究ZNF545在肝癌中的表觀遺傳學(xué)改變及其生物學(xué)功能,為其在臨床的應(yīng)用和明確肝癌發(fā)病機(jī)制提供新的線索。
方法：九株肝癌細(xì)胞系(HBX344,SNU449,SMMC-7721,SNU-182人肝癌貼壁細(xì)胞系,SNU387,Huh7,HepG2,LM3及PLC-PRF-5)、一株永生化細(xì)胞系L02和62例原發(fā)性肝癌組織標(biāo)本被用于本實(shí)驗(yàn)的研究。MSP技術(shù)、MTT實(shí)驗(yàn)、克隆形成、侵襲遷移實(shí)驗(yàn)、western-blot及流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)被應(yīng)用于本研究中。
結(jié)果：ZNF545在肝癌細(xì)胞系SNU449、SMMC7721、L02、Huh7、HepG2以及LM3中表達(dá)缺失,其啟動(dòng)子區(qū)在這六株細(xì)胞系中呈完全甲基化;在細(xì)胞系SNU-182人肝癌貼壁細(xì)胞系和PLC-PRF-5中有少量表達(dá),啟動(dòng)子區(qū)呈部分甲基化;在ZNF545高表達(dá)的細(xì)胞系HBX344和SNU387中,ZNF545的啟動(dòng)子區(qū)為非甲基化。在去甲基化藥物5-氮雜-2’-脫氧胞苷(5-AZA)誘導(dǎo)下,ZNF545在細(xì)胞系SNU449、SMMC7721、L02、Huh7、HepG2和LM3中恢復(fù)表達(dá),在SNU-182人肝癌貼壁細(xì)胞系和PLC-PRF-5細(xì)胞系中表達(dá)量增加。而在HBXF344和SNU387中,加藥前后ZNF545的表達(dá)量無明顯改變。在肝癌細(xì)胞系中ZNF545的表達(dá)缺失或下降受到其啟動(dòng)子區(qū)甲基化的調(diào)控。ZNF545的啟動(dòng)子區(qū)在肝癌組織中頻發(fā)甲基化,甲基化率為53.2%(33/62)?；謴?fù)表達(dá)ZNF545可明顯抑制SNU449和Huh7細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力,并促進(jìn)細(xì)胞的凋亡。
結(jié)論：ZNF545在肝癌中頻發(fā)甲基化。在肝癌細(xì)胞系中,ZNF545的表達(dá)受到啟動(dòng)子區(qū)甲基化的調(diào)控。ZNF545能夠抑制肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力并促進(jìn)細(xì)胞凋亡,在肝癌的發(fā)生和發(fā)展中可能發(fā)揮抑制作用。
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