一、背景
4%雞紅細(xì)胞是一種實(shí)驗(yàn)室常用的試劑，通常用于制備紅細(xì)胞懸液。4%雞紅細(xì)胞是通過(guò)無(wú)菌采集抗凝雞血，離心后獲得紅細(xì)胞沉淀，經(jīng)等量PBS洗滌2~3次至上清透亮，最終用阿氏液配至4%雞紅細(xì)胞。雞紅細(xì)胞具有較大的體積和較高的密度，因此在制備紅細(xì)胞懸液時(shí)具有較好的效果。4%雞紅細(xì)胞表示每1毫升雞紅細(xì)胞懸液中含有4%的雞紅細(xì)胞。
制備紅細(xì)胞懸液時(shí)，通常需要將雞紅細(xì)胞與生理鹽水或其他適當(dāng)?shù)娜芤夯旌?，以達(dá)到所需的濃度。4%雞紅細(xì)胞可用于制備不同濃度的紅細(xì)胞懸液，如1%、2%、3%等，以滿足不同的實(shí)驗(yàn)需求。
在實(shí)驗(yàn)室研究中，4%雞紅細(xì)胞常用于制備血涂片、血凝塊、血液流變學(xué)等實(shí)驗(yàn)。此外，4%雞紅細(xì)胞還可以用于制備其他類型的紅細(xì)胞懸液，如人紅細(xì)胞懸液、小鼠紅細(xì)胞懸液等。
需要注意的是，在使用4%雞紅細(xì)胞時(shí)，應(yīng)遵循實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)定，確保實(shí)驗(yàn)操作的安全性和有效性。同時(shí)，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的濃度和操作方法，以獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
4%雞紅細(xì)胞儲(chǔ)存的條件是溫度為-20℃到-70℃的低溫冰箱中。如果需要長(zhǎng)期保存，應(yīng)將血清或血漿儲(chǔ)存在-20℃到-70℃的環(huán)境中。如果需要在4℃下保存，則不能超過(guò)1個(gè)月。在解凍血清或血漿時(shí)，應(yīng)確保血清或血漿完全融化，并避免反復(fù)凍融。同時(shí)，為了避免污染或容器凍裂，必須預(yù)留一定的體積空間。在進(jìn)行血清學(xué)實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)避免使用變質(zhì)的血清或血漿，因?yàn)檫@會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
二、應(yīng)用
4%雞紅細(xì)胞可以用于雞傳染性支氣管炎病毒（重慶株）的分離鑒定及其生物學(xué)特性研究：
為了找出確切的病原，對(duì)該致病病原進(jìn)行了分離鑒定，并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行了研究。病原的分離與鑒定：無(wú)菌采集病死雞及瀕死雞嚴(yán)重病變腫大的腎臟制成懸液，菌檢陰性后按照常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法經(jīng)雞胚傳代，收集6代雞胚尿囊液，用4%雞紅細(xì)胞進(jìn)行血凝試驗(yàn)檢驗(yàn)是否含有新城疫病毒、流感病毒。結(jié)果表明，尿囊液與4%雞紅細(xì)胞無(wú)直接血凝性，用1％胰蛋白酶處理后4%雞紅細(xì)胞出現(xiàn)血凝性。將6代雞胚尿囊液裝入透析袋埋入固體PEG6000中進(jìn)行濃縮純化，經(jīng)過(guò)濾除菌，濾液即為濃縮純化的病原液。將濃縮純化的病原液進(jìn)一步經(jīng)致雞胚矮小化試驗(yàn)、新城疫干擾試驗(yàn)、動(dòng)物回歸試驗(yàn)和氣管環(huán)組織培養(yǎng)交叉中和試驗(yàn)證實(shí)了分離到的病原為雞傳染性支氣管炎病毒。
IBV重慶株理化性質(zhì)的測(cè)定：通過(guò)半數(shù)雞胚感染量試驗(yàn)測(cè)定EID50為10-6.74／mL；通過(guò)半數(shù)氣管環(huán)感染量試驗(yàn)測(cè)得TOCID50為10-4.52／mL；氯仿敏感試驗(yàn)表明重慶株對(duì)氯仿敏感；乙醚敏感試驗(yàn)表明重慶株對(duì)乙醚敏感；熱穩(wěn)定試驗(yàn)表明重慶株對(duì)熱敏感；酸堿敏感試驗(yàn)表明pH3.0與pH11.0的酸堿環(huán)境均可降低重慶株的毒力。用氣管環(huán)組織培養(yǎng)交叉中和試驗(yàn)鑒定分離株的血清型，結(jié)果重慶株與標(biāo)準(zhǔn)T陽(yáng)性血清有一定交叉反應(yīng)，中和效價(jià)為1：32，與其他Mussachusetts、Arkansas、Connecticut、Gray等血清型中和效價(jià)均為0，表明重慶株是一株IBV變異毒株。
IBV重慶株S1基因的克隆測(cè)序分析：提取IBV重慶株的RNA，對(duì)其S1基因應(yīng)用RT-PCR方法進(jìn)行了克隆與測(cè)序，使用DNAStar軟件進(jìn)行序列分析結(jié)果顯示，重慶株的S1基因與T、Mussachusetts、Arkansas、Connecticut、Gray等血清型S1基因同源性不高，分別為82.3％、77.5％、78.2％、78.6％、77.4％，進(jìn)一步通過(guò)向NCBI提交重慶株的基因序列，并根據(jù)BLAST軟件檢索到與其具有最大同源性的毒株為比利時(shí)的B1648株，同源性高達(dá)99.6％。
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