一、背景
小鼠胃平滑肌細胞是一種用于研究胃部疾病的細胞模型。通過使用小鼠胃平滑肌細胞，科學家們可以研究胃部疾病的病因、病理生理過程以及藥物的作用機制。
小鼠胃平滑肌細胞具有與人體相似的生理功能和基因表達模式，因此被廣泛用于藥物篩選和疾病模型的研究。這些細胞可以用于研究胃潰瘍、胃炎、胃癌等疾病的發(fā)病機制和藥物治療效果。
此外，小鼠胃平滑肌細胞還可以用于研究胃腸激素的作用機制和信號轉(zhuǎn)導通路。這些激素在調(diào)節(jié)消化、吸收、代謝等方面發(fā)揮著重要作用，因此對這些激素的研究有助于深入了解胃腸功能和疾病的發(fā)生機制。
小鼠胃平滑肌細胞(mouse gastric smooth muscle cells)是存在于小鼠胃部的平滑肌細胞，主要負責胃的收縮和運動，以幫助消化食物。這些細胞具有以下幾個主要特點：
形態(tài)特征：小鼠胃平滑肌細胞呈長條形或梭形，有多個分支狀突起，細胞核位于中央。
生理功能：小鼠胃平滑肌細胞具有自主收縮和節(jié)律性收縮的能力，能夠控制胃的蠕動和排空，從而幫助消化食物。
與疾病相關(guān)：小鼠胃平滑肌細胞的異常增殖或功能障礙可能與一些胃腸道疾病相關(guān)，如胃潰瘍、胃癌等。
研究應(yīng)用：小鼠胃平滑肌細胞可用于研究胃腸道疾病的發(fā)病機制、藥物篩選和治療等方面。例如，通過基因敲除或過表達技術(shù)，可以研究特定基因?qū)π∈笪钙交〖毎δ艿挠绊憽?br />
二、小鼠胃平滑肌細胞培養(yǎng)操作
1)復蘇小鼠胃平滑肌細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1 mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2)小鼠胃平滑肌細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3)小鼠胃平滑肌細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。
下面T25瓶為例；
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
三、應(yīng)用
小鼠胃平滑肌細胞可以用于柴胡疏肝散對功能性消化不良小鼠胃平滑肌細胞凋亡和NF-κB蛋白表達的影響：
探討柴胡疏肝散對功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)小鼠胃平滑肌細胞凋亡和NF-κB蛋白表達的影響,以進一步揭示疏肝理氣法促胃動力機制。
方法：將48只健康SD小鼠隨機分為正常組、模型組、多潘立酮組及柴胡疏肝散低、中、高劑量組。除正常組外,其余五組均通過改良夾尾激惹刺激法制造FD大鼠模型,于造模同一天分別使用多潘立酮水溶液(0.3g·L-1)和柴胡疏肝散低、中、高劑量水煎劑(0.16g?mL-1,0.32g?mL-1,0.64g?mL-1)進行灌胃,在造模4周后,測定各組小鼠胃排空率,采用HE染色觀察胃組織病理變化,利用透射電子顯微鏡觀察大鼠胃平滑肌細胞(smooth muscle cell,SMC)線粒體形態(tài),采用原位末端缺口標記法(TdT-mediated d UTP Nick-End Labeling,TUNEL)檢測小鼠胃SMC凋亡情況;免疫組化法檢測小鼠胃平滑肌細胞Bcl-2、Bax、NF-KB蛋白的表達。結(jié)果:各組大鼠胃組織病理學觀察未見糜爛、潰瘍、化生等器質(zhì)性病變。
透射電鏡觀察胃組織發(fā)現(xiàn)正常組小鼠胃SMC之間間隙正常,連接緊密,線粒體形態(tài)正常;模型組小鼠胃SMC間隙增寬,連接松弛,線粒體明顯腫脹,亦可見凋亡小體;多潘立酮組和柴胡疏肝散低、中、高劑量組胃SMC間隙正常,連接緊密,線粒體腫脹減輕,凋亡小體減少。與正常組比較,模型組大鼠胃排空率顯著降低(P<0.05),細胞凋亡率顯著增高(P<0.05),小鼠胃平滑肌細胞Bcl-2表達顯著減少(P<0.05),Bax、NF-KB表達顯著升高(P<0.05);與模型組比較,柴胡疏肝散低、中、高劑量組和多潘立酮組大鼠胃排空率均顯著升高(均P<0.05),胃SMC線粒體損傷顯著改善,細胞凋亡率和Bax、NF-KB表達水平均顯著降低(均P<0.05),Bcl-2表達水平則顯著升高(P<0.05);與多潘立酮組比較,柴胡疏肝散高劑量組胃排空率顯著升高(P<0.05),胃SMC凋亡率和Bax、NF-KB表達水平均顯著降低(均P<0.05),Bcl-2表達水平則顯著升高(P<0.05);柴胡疏肝散低、中、高劑量組間比較,中、高劑量組胃排空率和Bcl-2表達水平較低劑量組有顯著升高(均P<0.05),中、高劑量組胃SMC凋亡率、Bax、NF-KB表達水平較低劑量組顯著降低(均P<0.05)。
結(jié)論：
1、柴胡疏肝散可以降小鼠胃平滑肌細胞的凋亡率,從而發(fā)揮促胃動力作用,其機制是通過上調(diào)Bcl-2的表達、抑制Bax的表達來調(diào)節(jié)線粒體途徑的細胞凋亡來發(fā)揮作用。
2、FD的發(fā)生、發(fā)展可能與胃平滑肌NF-κB蛋白的表達密切相關(guān);柴胡疏肝散可以減少NF-κB蛋白的表達,抑制NF-κB凋亡信號通路異常激活導致的胃平滑肌的損傷,促進胃腸動力的恢復。
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