NK-92人惡性非霍奇金淋巴瘤患者NK細(xì)胞系的應(yīng)用！
小楊 / 2024-01-19 08:37:37
一、背景
NK-92人惡性非霍奇金淋巴瘤患者NK細(xì)胞系是一種用于研究非霍奇金淋巴瘤(NHL)的細(xì)胞系。NHL是一種惡性腫瘤，起源于淋巴系統(tǒng)中的B細(xì)胞、T細(xì)胞或NK細(xì)胞。NK-92細(xì)胞系是從一名患有高級(jí)別B細(xì)胞淋巴瘤的患者中分離出來(lái)的，因此它具有高度增殖能力和對(duì)多種腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。
NK-92人惡性非霍奇金淋巴瘤患者NK細(xì)胞系在腫瘤免疫治療研究中具有重要價(jià)值，因?yàn)樗梢宰鳛轶w外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛠?lái)評(píng)估新的治療方法和藥物的有效性。研究人員可以通過(guò)改變培養(yǎng)條件、添加生長(zhǎng)因子或使用基因編輯技術(shù)來(lái)改變NK-92細(xì)胞系的行為，以更好地模擬體內(nèi)環(huán)境并提高治療效果。
此外，NK-92人惡性非霍奇金淋巴瘤患者NK細(xì)胞系還可以用于研究腫瘤微環(huán)境對(duì)腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的影響。通過(guò)分析NK-92細(xì)胞與不同腫瘤細(xì)胞之間的相互作用，研究人員可以更好地了解腫瘤發(fā)展的機(jī)制，并為開(kāi)發(fā)新的抗腫瘤藥物提供理論基礎(chǔ)。
1)復(fù)蘇NK-92人惡性非霍奇金淋巴瘤患者NK細(xì)胞系：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)NK-92人惡性非霍奇金淋巴瘤患者NK細(xì)胞系傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
c、按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)NK-92人惡性非霍奇金淋巴瘤患者NK細(xì)胞系凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
下面T25瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
三、應(yīng)用
聚乙二醇化樹(shù)狀大分子包裹的納米金顆粒作為非病毒載體,將人鐵蛋白重鏈(FTH1)轉(zhuǎn)染到自然殺傷細(xì)胞92(NK-92細(xì)胞)中,并進(jìn)行體內(nèi)外細(xì)胞MRI成像。
方法：將第五代聚酰胺胺樹(shù)狀大分子用聚乙二醇(PEG)修飾之后包裹納米金顆粒作為非病毒載體,轉(zhuǎn)染FTH1基因到NK-92細(xì)胞內(nèi)。應(yīng)用核磁共振氫譜、紫外分光光度計(jì)和透射電子顯微鏡等對(duì)合成的載體材料進(jìn)行表征;采用瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)、CCK-8試劑盒、水動(dòng)力粒徑來(lái)檢測(cè)其相關(guān)特性;應(yīng)用熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀測(cè)定轉(zhuǎn)染效率;應(yīng)用3.0 T的MRI對(duì)轉(zhuǎn)染FTH1的NK92細(xì)胞進(jìn)行體內(nèi)外成像。
結(jié)果：合成的聚乙二醇化的包裹納米金顆粒的樹(shù)狀大分子{(Au0)25-G5.NH2-mPEG17}DENPs具有較好的生物相容性,材料細(xì)胞毒性較小,在氮磷比為1:1、2:1、5:1、10:1時(shí),轉(zhuǎn)染效率分別為57.8%、64.0%、80.2%、38.3%。在200和500μmol/L枸櫞酸鐵銨的條件下,MRI檢查發(fā)現(xiàn)T2加權(quán)像信號(hào)均降低,后者更為明顯。荷瘤小鼠的T2加權(quán)像信號(hào)也出現(xiàn)相應(yīng)的改變。
結(jié)論：聚乙二醇化樹(shù)狀大分子包裹的納米金顆粒能夠成功地轉(zhuǎn)染目的基因,MRI檢查能有效地在體內(nèi)外檢測(cè)FTH1轉(zhuǎn)染之后的NK-92細(xì)胞,本研究為MRI活體示蹤自然殺傷細(xì)胞過(guò)繼免疫腫瘤治療奠定了基礎(chǔ)。
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