變形桿菌屬通用PCR試劑盒的知識與應用及相關研究！
小楊 / 2024-01-17 08:52:01
一、背景
變形桿菌屬通用PCR試劑盒是一種用于檢測變形桿菌屬細菌的體外診斷試劑。它利用聚合酶鏈式反應（PCR）技術，能夠快速、準確地檢測出變形桿菌屬細菌的特定基因片段。
變形桿菌屬通用PCR試劑盒通常包含預混合的PCR反應液、引物和其他必要的試劑。使用時，只需將樣品加入反應液中，然后在PCR儀中完成擴增和檢測。由于PCR技術的高靈敏度和特異性，該試劑盒可以檢測出極低濃度的變形桿菌屬細菌，從而提高了診斷的準確性。
變形桿菌屬細菌是一類常見的腸道細菌，但在某些情況下，它們也可能引起食物中毒、尿路感染等疾病。因此，對于變形桿菌屬細菌的檢測在臨床診斷和治療中具有重要意義。
需要注意的是，使用變形桿菌屬通用PCR試劑盒需要具備一定的分子生物學知識和實驗技能。同時，試劑盒的質量和可靠性對于實驗結果至關重要，因此在使用前應進行質量檢查和確認。此外，試劑盒的儲存和使用應遵循說明書上的指示，以保證其有效性和安全性。
1、樣本采集：從患者體內采集血液、糞便、組織等樣本，并將其保存在無菌容器中。
2、DNA提?。簩⒉杉降臉颖具M行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取試劑盒。提取后的DNA應保存在-20°C或更低的溫度下。
3、PCR反應體系準備：根據變形桿菌屬通用PCR試劑盒的要求，配制PCR反應體系，包括引物、熒光探針、dNTPs、DNA聚合酶等。
4、PCR反應：將提取的DNA加入到PCR反應體系中，進行PCR反應。反應條件和時間根據試劑盒說明書的要求進行設置。
5、結果分析：將PCR反應后的產物進行熒光信號檢測，根據熒光信號的出現情況判斷是否存在變形桿菌屬的感染。
三、應用
針對食源性變形桿菌屬食物中毒事件逐年上升的趨勢,研究建立新型快速靈敏的變形桿菌屬檢測鑒定方法。通過變形桿菌屬通用PCR試劑盒建立3種常規(guī)PCR方法和1種熒光PCR方法,對66株變形桿菌屬鑒定,與傳統分離培養(yǎng)法和全自動微生物分析系統檢測法進行比較研究,結果如下:根據1961-2007年發(fā)表的218篇關于264起變形桿菌屬食物中毒案例分析,變形桿菌屬食物中毒自二十世紀的80年代到90年代到目前的21世紀,呈現上升趨勢,廣東省和山東省為變形桿菌屬食物中毒多發(fā)省份,絕大多數中毒事件都發(fā)生在夏秋季節(jié),以城市中的飲食服務單位居多,中毒食品多為動物性食品,尤其是熟食制品,中毒菌種主要是奇異變形桿菌和普通變形桿菌。在187起變形桿菌屬食物中毒的檢測方法中,94.65%采用傳統分離培養(yǎng)法,其余5.35%采用全自動微生物分析系統法,沒有任何采用PCR及其它分子生物學檢測方法的報道。
傳統分離培養(yǎng)法和全自動微生物分析系統檢測法對66株樣本分離菌株的鑒定結果全部為陽性,鑒定結果與中山大學附屬第三醫(yī)院和暨南大學附屬第一醫(yī)院菌種鑒定保存的結果一致,符合率100%,驗證了變形桿菌屬菌種的真實性。選取atpD基因和tuf基因作為靶序列,設計了3對特異性引物,分別建立了3種相應的檢測變形桿菌屬的變形桿菌屬通用PCR試劑盒常規(guī)PCR法,對3株變形桿菌屬標準菌株、66株樣品分離株及13株非變形桿菌屬菌株進行擴增實驗,結果顯示,3種變形桿菌屬通用PCR試劑盒常規(guī)PCR法對3株標準菌株和66株樣品分離株的檢測結果均為陽性,13株非變形桿菌屬菌株檢測結果均為陰性。
變形桿菌屬通用PCR試劑盒鑒定結果與傳統分離培養(yǎng)法和全自動微生物分析系統檢測法結果完全一致,但檢測時間僅為6-8 h,其檢測速度、靈敏度和特異性表現出獨特的優(yōu)勢?；赼tpD基因設計1對特異性引物,建立了1種SYBR GreenⅠ熒光PCR法,用于檢測變形桿菌屬,其鑒定結果與常規(guī)變形桿菌屬通用PCR試劑盒PCR方法完全一致,但本方法所耗時間僅為1-2 h,表現出更優(yōu)的特異性、重現性和靈敏度,并且操作更為簡便。對8條變形桿菌屬菌株atpD基因測序,其結果與Genbank中變形桿菌屬atpD基因序列不同,本文所測基因序列是截至目前為止尚未公開的新的變形桿菌屬atpD基因序列。
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