沙雷菌通用PCR試劑盒的組成與應(yīng)用及相關(guān)研究！
小楊 / 2024-01-23 09:17:36
一、背景
沙雷菌通用PCR試劑盒是一種用于檢測(cè)沙雷菌的PCR試劑盒。沙雷菌是一種常見的細(xì)菌，存在于各種環(huán)境中，包括水、土壤、食品等。該試劑盒通過特定的PCR引物和探針，能夠特異性地檢測(cè)沙雷菌的DNA，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)沙雷菌的快速、準(zhǔn)確檢測(cè)。
沙雷菌是一種革蘭氏陰性菌，可以引起多種感染，包括尿路感染、呼吸道感染和血液感染等。該試劑盒包含PCR反應(yīng)體系和引物，可以擴(kuò)增沙雷菌的DNA序列，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)沙雷菌的快速檢測(cè)和鑒定。
PCR反應(yīng)緩沖液：用于調(diào)節(jié)PCR反應(yīng)體系的pH值和離子強(qiáng)度。
dNTPs:即脫氧核苷酸三磷酸，是PCR反應(yīng)中必需的原料。
MgCl2:即二氫氧化鎂，是PCR反應(yīng)中必需的離子。
TaqDNA聚合酶：即熱穩(wěn)定DNA聚合酶，可以催化DNA的合成反應(yīng)。
引物：即特異性DNA序列，可以與目標(biāo)DNA序列互補(bǔ)結(jié)合，引導(dǎo)PCR反應(yīng)進(jìn)行。
1、樣本采集：從患者體內(nèi)采集血液、糞便、組織等樣本，并將其保存在無菌容器中。
2、DNA提?。簩⒉杉降臉颖具M(jìn)行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取試劑盒。提取后的DNA應(yīng)保存在-20°C或更低的溫度下。
3、PCR反應(yīng)體系準(zhǔn)備：根據(jù)試劑盒說明書的要求，配制PCR反應(yīng)體系，包括引物、熒光探針、dNTPs、DNA聚合酶等。
4、PCR反應(yīng)：將提取的DNA加入到PCR反應(yīng)體系中，進(jìn)行PCR反應(yīng)。反應(yīng)條件和時(shí)間根據(jù)試劑盒說明書的要求進(jìn)行設(shè)置。
5、結(jié)果分析：將PCR反應(yīng)后的產(chǎn)物進(jìn)行熒光信號(hào)檢測(cè)，根據(jù)熒光信號(hào)的出現(xiàn)情況判斷是否存在沙雷菌的感染。
四、應(yīng)用
沙雷菌通用PCR試劑盒可以用于臨床分離黏質(zhì)沙雷菌質(zhì)粒編碼的16S rRNA甲基化酶基因與β-內(nèi)酰胺酶基因的研究：
安徽地區(qū)臨床分離黏質(zhì)沙雷菌藥敏情況和質(zhì)粒介導(dǎo)的16S r RNA甲基化酶檢出率與基因型,為臨床合理選擇抗菌藥物提供依據(jù)。研究臨床沙雷菌通用PCR試劑盒分離黏質(zhì)沙雷菌質(zhì)粒介導(dǎo)的16S r RNA甲基化酶耐藥基因與β-內(nèi)酰胺酶基因的共轉(zhuǎn)移情況。
材料與方法：菌株來源201株黏質(zhì)沙雷臨床分離菌株,來源于安徽省細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)中心監(jiān)測(cè)網(wǎng)所屬34所醫(yī)院(由皖南、皖中、皖北不同級(jí)別的醫(yī)院組成)2005年2012年每年9月份住院和門診患者的各類臨床標(biāo)本。藥敏實(shí)驗(yàn)質(zhì)控菌株大腸埃希菌ATCC25922,轉(zhuǎn)移接合試驗(yàn)受體菌大腸埃希菌J53 AZR,二者均為安徽省細(xì)菌耐藥監(jiān)控中心保存。
方法：
1、采用MH瓊脂倍比稀釋法測(cè)定臨床分離黏質(zhì)沙雷菌株對(duì)抗菌藥物的敏感性,質(zhì)控菌采用E.coli ATCC 25922。
2、煮沸法提取細(xì)菌的總DNA,堿裂解法提取質(zhì)粒DNA;用沙雷菌通用PCR試劑盒聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法擴(kuò)增質(zhì)粒介導(dǎo)16S r RNA甲基化酶基因;PCR產(chǎn)物純化測(cè)序,測(cè)序結(jié)果在Gen Bank中經(jīng)Blast程序比對(duì)分析,以明確16S r RNA甲基化酶基因的基因型別以及是否突變。
3、用16S r RNA甲基化酶基因陽性菌株與大腸埃希菌J53AzR行轉(zhuǎn)移接合試驗(yàn);對(duì)接合子進(jìn)行生化鑒定并經(jīng)PCR檢測(cè)耐藥基因,沙雷菌通用PCR試劑盒PCR擴(kuò)增產(chǎn)物DNA測(cè)序確認(rèn);采用Muller-Hinton瓊脂對(duì)比稀釋法測(cè)定大腸埃希菌J53AzR與接合子對(duì)抗菌藥物的最低抑菌濃度(MIC)。
4、以16S r RNA甲基化酶基因陽性臨床分離菌株的總DNA為模板,采用沙雷菌通用PCR試劑盒PCR方法擴(kuò)增β-內(nèi)酰胺酶基因;PCR產(chǎn)物純化測(cè)序,測(cè)序結(jié)果在Gen Bank中經(jīng)Blast程序比對(duì),比較分析16S r RNA甲基化酶基因型別與β-內(nèi)酰胺酶基因型別關(guān)系。
5、以16S r RNA甲基化酶基因陽性接合子菌株質(zhì)粒DNA為模板,沙雷菌通用PCR試劑盒PCR擴(kuò)增β-內(nèi)酰胺酶基因;PCR產(chǎn)物純化測(cè)序,測(cè)序結(jié)果在Gen Bank中經(jīng)Blast程序比對(duì),明確基因型。探究16S r RNA甲基化酶基因與β-內(nèi)酰胺酶基因是否共轉(zhuǎn)移。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司擁有對(duì)菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質(zhì)服務(wù)，對(duì)購(gòu)買項(xiàng)目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項(xiàng)目準(zhǔn)確到位，都有相關(guān)人士進(jìn)行維護(hù),確保您在
微生物菌種查詢網(wǎng)中獲得最優(yōu)質(zhì)服務(wù)！也正因?yàn)榇耍本┌贇W博偉生物技術(shù)有限公司與國(guó)內(nèi)外多家研制單位、生物制藥、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好、長(zhǎng)期和穩(wěn)定的合作關(guān)系！
下載附件
上一篇：犬流感病毒通用PCR試劑盒的應(yīng)用及研究動(dòng)態(tài)！
下一篇：寄生曲霉PCR試劑盒的應(yīng)用及操作步驟！