NCI-H719細胞系人小細胞肺癌細胞的知識與應用！
小楊 / 2024-02-06 09:16:07
一、背景
NCI-H719細胞系|人小細胞肺癌細胞是一種人小細胞肺癌細胞系，建立于1973年。NCI-H719細胞系|人小細胞肺癌細胞生長特性為半貼壁，細胞傳代方法為1:2-1:3傳代，每周換液2-3次。需要注意的是，該細胞系需要在低溫避光的環(huán)境下保存。
1)復蘇NCI-H719細胞系|人小細胞肺癌細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1 mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2)NCI-H719細胞系|人小細胞肺癌細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-3min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3)人小細胞肺癌細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。
下面T25瓶為例；
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
三、應用
目的：
(1)利用靶向高通量測序技術篩選適合靶向治療方案的晚期非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)獲益人群,同時探索通過靶向高通量測序技術獲得的腫瘤突變負荷(Tumor mutational burden,TMB)是否可以作為免疫治療預測標記物,分析靶向高通量測序技術作為臨床動態(tài)監(jiān)測和指導NSCLC患者靶向治療和免疫治療的可行性,從而為NSCLC患者快速精確及個體化治療提供依據(jù);
(2)分析非小細胞肺癌患者中的PIK3CA突變類型與臨床病理特征的相關性,同時分析PIK3CA與EGFR突變共存NSCLC患者接受表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑(Epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)治療預后情況,進一步揭示PIK3CA突變在晚期EGFR突變NSCLC患者預后的預測價值以及與EGFR突變耐藥的相關性,為晚期NSCLC患者的有效治療提供新的靶點,同時為對EGFR-TKIs產(chǎn)生耐藥的晚期NSCLC患者的耐藥逆轉提供新的思路;
(3)探討PI3K/Akt通路抑制劑LY294002對EGFR-TKI原發(fā)性耐藥的非小細胞肺癌細胞對厄洛替尼的敏感性的影響并分析其內(nèi)在分子機制,為EGFR-TKIs聯(lián)合PI3K抑制劑對逆轉NSCLC的耐藥性的臨床治療提供理論依據(jù)。
方法：
(1)回顧性分析533例初診和復發(fā)的非小細胞肺癌患者的臨床病理資料,提取患者血液或腫瘤組織中的DNA并進行靶向高通量測序,靶向測序基因包括EGFR、TP53、ALK、ROS1、BRAF、KRAS、ERBB2、PIK3CA在內(nèi)的34個常見腫瘤用藥相關基因,使用卡方檢驗分析EGFR、BRAF、ALK、ROS1突變與臨床病理特征相關性;利用生物信息學方法計算患者TMB值,免疫組織化學方法檢測非小細胞肺癌患者腫瘤組織表面PD-L1表達水平,通過R軟件3.5.3版本分析TMB與PD-L1表達水平的相關性;以TMB平均值為臨界值將接受免疫治療的非小細胞肺癌患者分為TMB高(TMB-H)和TMB低(TMB-L)兩組,并采用Kaplan-Meier生存分析兩組患者與無進展生存期(progression-free survival,PFS)關系,繪制生存曲線;
(2)回顧性分析29例PIK3CA突變非小細胞肺癌患者臨床病理特征,利用卡方檢驗分析不同PIK3CA突變類型與臨床病理特征相關性。靶向高通量測序技術分析與PIK3CA突變共存的其他驅動基因突變類型,根據(jù)PIK3CA是否與EGFR共突變,將接受EGFR-TKI治療的晚期非小細胞肺癌患者分為PIK3CA與EGFR共突變組和只有EGFR突變組,并采用Kaplan-Meier生存分析兩組患者與無進展生存期(progression-free survival,PFS)關系,繪制生存曲線,分析PIK3CA突變是否影響EGFR突變非小細胞肺癌患者接受EGFR-TKI治療效果;
(3)通過MTT實驗分析不同濃度LY294002和厄洛替尼對NCI-H460、NCI-H719細胞系|人小細胞肺癌細胞和NCI-H661的細胞生長增殖的影響,同時分析聯(lián)合EGFR-TKI厄洛替尼和PI3K抑制劑LY294002對NSCLC細胞生長的抑制作用;利用流式細胞儀分析厄洛替尼或LY294002以及厄洛替尼與LY294002聯(lián)合用藥對NSCLC細胞NCI-H460、NCI-H719細胞系|人小細胞肺癌細胞和NCI-H661細胞凋亡的影響;提取厄洛替尼或LY294002以及厄洛替尼與LY294002聯(lián)合用藥處理后的NCI-H460和NCI-H661細胞的總蛋白,利用蛋白免疫印跡(Western Blot)技術檢測PI3K/AKT信號通路相關蛋白p70S6K和磷酸化p70S6K蛋白的表達水平。
北京百歐博偉生物技術有限公司的
微生物菌種查詢網(wǎng)提供微生物菌種保藏、測序、購買等服務,是中國微生物菌種保藏中心的服務平臺，并且是集微生物菌種、菌種,ATCC菌種、細胞、培養(yǎng)基為一體的大型微生物查詢類網(wǎng)站，自設設備及技術的微生物菌種保藏中心！歡迎廣大客戶來詢！
下載附件
上一篇：丙酸蛛網(wǎng)菌PCR試劑盒的主要成分與應用研究！
下一篇：柏氏血矛線蟲PCR試劑盒的操作步驟與相關研究！