柏氏血矛線蟲PCR試劑盒的操作步驟與相關(guān)研究！
小楊 / 2024-02-07 08:28:20
一、背景
柏氏血矛線蟲PCR試劑盒可用于科研實驗等領(lǐng)域，適用于檢測柏氏血矛線蟲。它具有即開即用、方便快捷的特點，用戶只需要提供樣品RNA模板即可進行檢測。
柏氏血矛線蟲是一種常見的寄生蟲，寄生于牛、羊等家畜的消化系統(tǒng)中，對家畜的健康和生產(chǎn)性能產(chǎn)生負面影響。因此，柏氏血矛線蟲的檢測對于畜牧業(yè)的發(fā)展和動物疾病的防治具有重要意義。
二、該試劑盒通常包括以下成分
PCR反應液：包括PCR緩沖液、dNTPs、引物、Taq聚合酶等。
標準品：用于定量檢測柏氏血矛線蟲DNA的濃度。
陰性對照：用于排除假陽性結(jié)果的可能性。
陽性對照：用于確認試劑盒的準確性和可靠性。
使用柏氏血矛線蟲PCR試劑盒時，首先需要提取樣本中的DNA，然后將提取的DNA加入到PCR反應液中進行擴增。通過檢測擴增產(chǎn)物的熒光信號強度，可以確定樣本中是否存在柏氏血矛線蟲DNA。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強、操作簡便等優(yōu)點，適用于臨床診斷和流行病學調(diào)查等領(lǐng)域。
1、樣本采集：從患者體內(nèi)采集血液、糞便、組織等樣本，并將其保存在無菌容器中。
2、DNA提取：將采集到的樣本進行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取試劑盒。提取后的DNA應保存在-20°C或更低的溫度下。
3、PCR反應體系準備：根據(jù)試劑盒說明書的要求，配制PCR反應體系，包括引物、熒光探針、dNTPs、DNA聚合酶等。
4、PCR反應：將提取的DNA加入到PCR反應體系中，進行PCR反應。反應條件和時間根據(jù)試劑盒說明書的要求進行設(shè)置。
5、結(jié)果分析：將PCR反應后的產(chǎn)物進行熒光信號檢測，根據(jù)熒光信號的出現(xiàn)情況判斷是否存在柏氏血矛線蟲的感染。
四、應用
擬采用柏氏血矛線蟲PCR試劑盒PCR技術(shù),對陜西地區(qū)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲分離株的內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(internal transcribed spacer,ITS)基因序列進行擴增、測序和分析,以了解ITS基因的遺傳變異情況;根據(jù)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲ITS2基因特點,設(shè)計特異性引物并對退火溫度進行優(yōu)化建立糞便蟲卵PCR檢測方法,將所建立柏氏血矛線蟲PCR試劑盒PCR應用于臨床奶山羊糞便樣品中捻轉(zhuǎn)血矛線蟲卵的檢測,并與糞便鏡檢結(jié)果進行對比,獲得以下結(jié)果：
1、對采自陜西咸陽地區(qū)不同年份的44株捻轉(zhuǎn)血矛線蟲分離株,進行ITS基因位點的擴增、測序和分析。結(jié)果顯示,捻轉(zhuǎn)血矛線蟲ITS1的長度為400或404 bp、種內(nèi)變異率為0.0～3.6%,共27個類型,將其與參考序列比對發(fā)現(xiàn)存在16個堿基突變位點,ITS2的長度為231bp,種內(nèi)變異率為0.0～6.9%,共20個基因類型,與參考序列比對發(fā)現(xiàn)共15個堿基突變位點。結(jié)果表明,陜西咸陽地區(qū)2015—2020年之間的羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的ITS rDNA序列的種內(nèi)變異率較小,且尚未出現(xiàn)種群的分化。種系發(fā)育進化樹結(jié)果顯示各國的分離株進化關(guān)系較近,且同一地區(qū)的不同分離株未匯聚在同一枝,初步分析表明,捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的ITS基因的變異情況與不同的地理條件之間的相關(guān)性不明顯,世界各地的捻轉(zhuǎn)血矛線蟲分離株之間存在較高的基因相似度。
2、基于特異性引物對(Hc.F、Hc.R)建立的柏氏血矛線蟲PCR試劑盒PCR檢測方法的特異性良好,能將捻轉(zhuǎn)血矛線蟲卵同其他常見線蟲卵(細頸線蟲、似血矛線蟲、蘭式毛尾線蟲、尖尾線蟲、網(wǎng)尾線蟲、夏伯特線蟲、蛇形毛圓線蟲、粗紋食道口線蟲、綿羊毛尾線蟲等)特異性區(qū)分。PCR反應的最佳退火溫度為53℃。在DNA模板含量較低(0.298 pg)時,仍能檢出,表明其具有較高的靈敏性。85份奶山羊糞便樣品,經(jīng)糞便鏡檢共檢出23份捻轉(zhuǎn)血矛線蟲陽性糞樣(27.06%,23/85),利用特異性PCR鏡檢共檢出38份捻轉(zhuǎn)血矛線蟲陽性糞樣(44.71%,38/85),且鏡檢和PCR方法診斷結(jié)果一致性一般(Kappa=0.530)。綜上所述,陜西咸陽地區(qū)的羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的ITS rDNA基因序列的遺傳進化程度較低。所建立的分子生物學方法能準確地將捻轉(zhuǎn)血矛線蟲卵從糞便樣品中檢測出,為臨床檢測捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病提供了一種診斷方法。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司擁有對菌種、細胞、培養(yǎng)基、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質(zhì)服務(wù)，對購買項目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項目準確到位，都有相關(guān)人士進行維護,確保您在
微生物菌種查詢網(wǎng)中獲得最優(yōu)質(zhì)服務(wù)！也正因為此，北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司與國內(nèi)外多家研制單位、生物制藥、第三方檢測機構(gòu)和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好、長期和穩(wěn)定的合作關(guān)系！
下載附件
上一篇：NCI-H719細胞系人小細胞肺癌細胞的知識與應用！
下一篇：NRK（大鼠腎細胞）的特點與培養(yǎng)及應用！