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WEHI-231，也被稱為WEHI 231或WEHI231，是一種小鼠B淋巴瘤細胞系。這種細胞系源于BALB/c x NXB F1小鼠，通過礦物油注射誘導(dǎo)產(chǎn)生。WEHI-231細胞在生物醫(yī)學(xué)研究中具有廣泛的應(yīng)用，特別是在腫瘤學(xué)、免疫學(xué)、藥物篩選和細胞治療等領(lǐng)域。

 

首先，WEHI-231（小鼠B淋巴瘤細胞）細胞系常被用作研究B細胞淋巴瘤的模型。由于其具有淋巴瘤的特性，這種細胞系可用于模擬人體B細胞淋巴瘤的發(fā)病過程，從而深入了解淋巴瘤的生物學(xué)特性、發(fā)病機制和治療靶點。

 

其次，WEHI-231（小鼠B淋巴瘤細胞）細胞也常被用于藥物篩選和細胞治療研究。由于其具有較高的增殖能力和對多種藥物的敏感性，這種細胞系可用于測試新藥物對淋巴瘤細胞的細胞毒性、抗增殖作用或誘導(dǎo)凋亡的能力。此外，WEHI-231細胞還可作為基因轉(zhuǎn)染的宿主細胞，用于研究基因治療對淋巴瘤的治療效果。

 

 

1)復(fù)蘇WEHI-231（小鼠B淋巴瘤細胞）細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。

 

將含有1 mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

 

2)WEHI-231（小鼠B淋巴瘤細胞）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

 

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

 

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

 

c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

 

d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

 

3)WEHI-231（小鼠B淋巴瘤細胞）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。

 

 

a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。

 

b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。

 

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 

 

 

miR-29直接靶向PTEN影響PI3K/AKT通路調(diào)控B細胞AICD前面的實驗,在轉(zhuǎn)基因小鼠GS29來源的nave B細胞上證實了低表達miR-29能夠促進B細胞的AICD。但原代B細胞體外難于存活,后續(xù)實驗難于展開。故而先選用了公認的B細胞AICD體外模型,即體外以羊抗鼠anti-IgM刺激WEHI-231（小鼠B淋巴瘤細胞）細胞誘導(dǎo)AICD。轉(zhuǎn)染microRNA-29a/b/c的mimics后WEHI-231（小鼠B淋巴瘤細胞）細胞的AICD明顯降低,而轉(zhuǎn)染inhibitor后WEHI-231細胞的AICD明顯增強。這些實驗再次證明了miR-29能夠有效調(diào)控B細胞的AICD。

 

對targetscan網(wǎng)站提供的miR-29的1000多個靶點進行GO分析,發(fā)現(xiàn)這些靶點中有85個靶點涉及細胞存活與生長發(fā)育。再對這85個基因,進行keggpathway富集分析,選取選取couts比較高的四個pathway進行vanny分析,篩選出兩個具有廣泛作用的兩個分子:PTEN與PIK3CA。而后,我們構(gòu)建了PTEN、PIK3CA以及它們突變體的報告基因用于雙熒光報告基因?qū)嶒?驗證靶點。

 

結(jié)果顯示,miR-29能夠直接靶向PTEN,抑制PTEN 3’UTR報告基因的活性。而對于PIK3CA的靶點驗證未能得到證實。后續(xù)我們構(gòu)建了PTEN的質(zhì)粒和siRNA,分別進行過表達和干擾實驗,進一步驗證miR-29可通過PTEN調(diào)控WEHI-231（小鼠B淋巴瘤細胞）細胞的AICD。PTEN(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten)基因一方面是個明星抑癌基因,另一方面其帶有雙重特異性磷酸酶,能夠使PIP3(phosphatidylinositol-3,4,5-triphosphate,PIP3)脫磷酸化,最終抑制PI3K/AKT通路。而B細胞的AICD主要涉及三種信號,PLCγ,Ras和PI3K/AKT。故而,我們western蛋白印跡法檢測了antagomir-29a-3p處理的WEHI-231細胞中p-AKT水平,發(fā)現(xiàn)p-AKT水平明顯低于對照組。這一實驗證實mir-29通過靶向PTEN影響PI3K/AKT通路。進一步研究,我們發(fā)現(xiàn)p-BAD水平明顯降低;抗凋亡分子Bcl-2和Bcl-xl水平亦降低。以上結(jié)果顯示,mir-29通過靶向PTEN抑制PI3K/AKT信號通路,導(dǎo)致AKT磷酸化水平降低,影響下游抗凋亡分子Bcl-2和Bcl-xl的表達,最終增強B細胞的AICD。

 

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