微小根毛霉：具體用途為釀造白酒和產(chǎn)淀粉酶！
小楊 / 2024-05-31 09:09:21
微小根毛霉是Rhizomucor屬的微生物，原產(chǎn)地為中國。PDA培養(yǎng)基上生長較快，培養(yǎng)4天直徑幾達9cm，菌絲初為白色，后變?yōu)橥粱疑疵鏌o色。菌絲無隔，分枝，與孢囊梗相對生出假根，具囊軸，無囊托，孢囊孢子球形。耐熱，50℃生長良好。主要用途為研究，具體用途為釀造白酒，產(chǎn)淀粉酶。
一、菌種簡介
規(guī)格：凍干物
拉丁屬名：Rhizomucor Pusillus
拉丁名稱：Rhizomucor pusillus
來源歷史：←中國科學(xué)院成都生物研究所
收藏時間：2018/1/10
原始編號：JSM-9(H).11
原產(chǎn)國：中國
資源歸類編碼：15151319108
模式菌株：非模式菌株
主要用途：研究
特征特性：PDA培養(yǎng)基上生長較快，培養(yǎng)4天直徑幾達9cm，菌絲初為白色，后變?yōu)橥粱疑?，反面無色。菌絲無隔，分枝，與孢囊梗相對生出假根，具囊軸，無囊托，孢囊孢子球形。耐熱，50℃生長良好。
具體用途：釀造白酒。產(chǎn)淀粉酶。
生物危害程度：四類
培養(yǎng)基名稱：馬鈴薯、葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)
培養(yǎng)基成分：馬鈴薯提取液 1.0L，葡萄糖 20.0g，瓊脂 15.0g，pH自然。[注] 馬鈴薯提取液：取去皮馬鈴薯200g，切成小塊，加水1.0L煮沸30min，濾去馬鈴薯塊，將濾液補足至1.0L。
培養(yǎng)溫度：48℃
需氧類型：好氧
分離基物：中高溫大曲（成品曲）
采集地：江蘇省淮安市漣水縣
保存方法：-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法
共享方式：公益性共享；資源純交易性共享；合作研究共享；資源交換性共享
用途：釀造白酒。產(chǎn)淀粉酶。
注意事項：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準）
二、微生物培養(yǎng)方法
1、平板劃線分離法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面，通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落。
2、稀釋涂布平板法將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。
上述兩種方法雖然都可以實現(xiàn)觀察菌落特征的目的，但平板劃線分離法不能對菌落計數(shù)，而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過程復(fù)雜，對平板的要求比較高，可參照以下步驟：
a、制備平板培養(yǎng)基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃，向氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均勻，然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿，輕輕搖動培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部，待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。
b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g，放入盛100ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振搖15～20min混合均勻，用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻，制成活性污泥混合液。
c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培養(yǎng)基表面的中央位置，用無菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴展，使之分布均勻。
三、實驗內(nèi)容
1、稱量→溶化→調(diào)pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查
2、干熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物
3、高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查
4、過濾除菌：組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌
四、保存方法
1、傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣。
2、液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。
3、懸液保存法：
①蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。
②糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。
4、載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。
5、常用的冷凍保存法：
①低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進行保存的。
②干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進行冷凍保存。
③液氮保存法(-196℃)：是適用范圍最廣的微生物保存法。
五、注意事項
1、菌種常規(guī)培養(yǎng)時間：細菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。
2、菌種恢復(fù)培養(yǎng)前，建議將收到的菌種安瓿保存在 6-10°C 的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后處于休眠狀態(tài)，延遲期較長，如在說明建議的培養(yǎng)時間還未長起來，請繼續(xù)在相應(yīng)的環(huán)境下多培養(yǎng) 24 小時或者更長時間，直至菌種培養(yǎng)完成，有的菌種需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長，一般來說菌種培養(yǎng)穩(wěn)定后才能用于您的后續(xù)實驗。
3、初次使用時請嚴格按照本說明書推薦條件和操作步驟進行復(fù)活培養(yǎng)，如使用其它類型培養(yǎng)基或培養(yǎng)條件造成菌種不活等損失，我單位不負責(zé)任。
4、恢復(fù)培養(yǎng)厭氧菌時，在操作過程中應(yīng)嚴格控制厭氧條件：制作培養(yǎng)基時，應(yīng)使用厭氧螺口試管，并利用高純氮氣去除試管和培養(yǎng)基中的氧氣，使用者應(yīng)保證菌種的安全存儲和操作，帶菌廢棄物應(yīng)高壓滅菌處理后丟棄。
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