沙門氏菌生化鑒定條及成套生化鑒定管的原理與使用方法！
小楊 / 2025-10-11 10:14:26
沙門氏菌的生化鑒定是微生物實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)該菌屬的關(guān)鍵步驟，生化鑒定條和成套生化鑒定管（傳統(tǒng)試管組合）是常用工具，二者原理一致（基于細(xì)菌對(duì)不同底物的代謝特性），但操作流程和適用場(chǎng)景略有差異。以下從核心原理、兩類工具的使用方法、結(jié)果判讀及注意事項(xiàng)四方面詳細(xì)說明：
一、核心原理：利用沙門氏菌的特異性代謝特征
沙門氏菌作為腸桿菌科菌屬，具有獨(dú)特的生化反應(yīng)模式，核心特征包括：
發(fā)酵特性：發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不發(fā)酵乳糖、蔗糖；
酶活性：不產(chǎn)生尿素酶（尿素試驗(yàn)陰性）、不產(chǎn)生 β- 半乳糖苷酶（ONPG 試驗(yàn)陰性），產(chǎn)生硫化氫（H?S 試驗(yàn)陽性）；
其他：枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)陽性、吲哚試驗(yàn)陰性、動(dòng)力試驗(yàn)陽性等。
生化鑒定工具通過檢測(cè)這些代謝產(chǎn)物的變化，與標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)譜對(duì)比，實(shí)現(xiàn)菌種鑒定。
二、成套生化鑒定管的使用（傳統(tǒng)方法，適用于手工操作）
成套生化鑒定管是將
沙門氏菌鑒定所需的關(guān)鍵生化試驗(yàn)（如葡萄糖、乳糖、H?S、尿素等）單獨(dú)制成試管培養(yǎng)基，需逐一操作，適合樣本量少、對(duì)成本敏感的實(shí)驗(yàn)室。
1、準(zhǔn)備工作
樣品預(yù)處理：待檢菌株需先經(jīng)增菌培養(yǎng)和分離培養(yǎng)（如
SS 瓊脂、
麥康凱瓊脂），挑取單個(gè)典型菌落（
沙門氏菌在 SS 瓊脂上為無色、透明或半透明菌落，中心可能有黑色 H?S 沉淀），接種至普通營(yíng)養(yǎng)肉湯，36±1℃培養(yǎng) 18-24 小時(shí)，獲得純培養(yǎng)菌液（濁度需一致，避免菌量不足影響反應(yīng)）。
試劑與器材：成套鑒定管、無菌接種環(huán)（直徑 3mm）、酒精燈、培養(yǎng)箱（36±1℃）、生理鹽水（0.85%）。
2、常用鑒定管組合及操作步驟
生化試驗(yàn) 培養(yǎng)基成分 操作方法 反應(yīng)觀察時(shí)間
葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn) 葡萄糖、溴甲酚紫（pH 指示劑）、小倒管（測(cè)產(chǎn)氣） 用無菌接種環(huán)挑取純菌液，穿刺接種至試管，36±1℃培養(yǎng) 24-48 小時(shí)
乳糖發(fā)酵試驗(yàn) 乳糖、溴甲酚紫、小倒管 同葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn) 24-48 小時(shí)
硫化氫（H?S）試驗(yàn) 枸櫞酸鐵銨（H?S 底物）、硫代硫酸鈉、酚紅 穿刺接種（需穿透培養(yǎng)基底部），36±1℃培養(yǎng) 24-72 小時(shí)
尿素酶試驗(yàn) 尿素、酚紅 涂布接種（菌液均勻涂于培養(yǎng)基表面），36±1℃培養(yǎng) 24-48 小時(shí)
枸櫞酸鹽利用試驗(yàn) 枸櫞酸鈉、溴麝香草酚藍(lán) 劃線接種（沿斜面劃線），36±1℃培養(yǎng) 24-48 小時(shí)
吲哚試驗(yàn) 蛋白胨、酵母浸膏 接種后培養(yǎng) 24 小時(shí)，加入 1mL 吲哚試劑，搖勻 5 分鐘內(nèi)觀察
動(dòng)力試驗(yàn) 半固體營(yíng)養(yǎng)瓊脂 穿刺接種（僅刺至培養(yǎng)基 1/2 深度，不穿透），36±1℃培養(yǎng) 24 小時(shí)
3、結(jié)果記錄
按“陽性（+）”“陰性（-）”記錄每個(gè)試管的反應(yīng)，形成沙門氏菌的生化反應(yīng)譜（典型譜：葡萄糖 + 產(chǎn)酸產(chǎn)氣、乳糖 -、H?S+、尿素酶 -、枸櫞酸鹽 +、吲哚 -、動(dòng)力 +）。
三、生化鑒定條的使用（商品化試劑盒，高效便捷）
生化鑒定條是將多種生化試驗(yàn)集成在一條塑料條 / 卡上，配套試劑和判讀標(biāo)準(zhǔn)，適合樣本量多、需快速鑒定的場(chǎng)景，操作更標(biāo)準(zhǔn)化，誤差更小。以API 20E 鑒定條（最常用）為例，步驟如下：
1、準(zhǔn)備工作
菌液制備：挑取單個(gè)典型菌落，接種至營(yíng)養(yǎng)肉湯（36±1℃，18-24 小時(shí)），或直接用生理鹽水制備成0.5 麥?zhǔn)蠞岫鹊木鷳乙海岫炔蛔銜?huì)導(dǎo)致反應(yīng)弱陽性，需用濁度計(jì)校準(zhǔn)）。
器材準(zhǔn)備：API 20E 鑒定條、配套反應(yīng)管、礦物油（用于厭氧試驗(yàn)孔）、培養(yǎng)箱（36±1℃）、API 判讀手冊(cè) / 軟件。
2、操作步驟
接種：用無菌移液器吸取 0.5 麥?zhǔn)蠞岫鹊木鷳乙?，滴入鑒定條的每個(gè)反應(yīng)孔（除“NO?”孔需先加 1 滴試劑 A 外），每孔滴滿（約 0.1mL）；其中厭氧孔（如葡萄糖、果糖、麥芽糖等發(fā)酵孔）需在表面覆蓋 1 層礦物油（約 3mm 厚，隔絕空氣）。
培養(yǎng)：將接種好的鑒定條放入配套反應(yīng)管中，垂直置于 36±1℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)18-24 小時(shí)（不可超過 24 小時(shí)，避免過度發(fā)酵導(dǎo)致結(jié)果偏差）。
加試劑：培養(yǎng)后，需對(duì)特定孔添加試劑以觀察反應(yīng)：
吲哚（IND）孔：加 1 滴吲哚試劑 A 和 1 滴試劑 B；
硝酸鹽還原（NO?）孔：若初始培養(yǎng)后無氣泡（未產(chǎn) N?），加 1 滴試劑 A 和 1 滴試劑 B，10 分鐘內(nèi)觀察；
尿素酶（URE）孔：直接觀察顏色變化，無需加試劑。
3、結(jié)果判讀
根據(jù)各孔顏色 / 形態(tài)變化（如紅色→陽性、黃色→陰性，或出現(xiàn)黑色沉淀→H?S 陽性），對(duì)照 API 20E 判讀表，將每個(gè)反應(yīng)孔的結(jié)果轉(zhuǎn)換為“數(shù)值代碼”（如陽性 = 1，陰性 = 0，每 3 個(gè)孔為一組，組合成 7 位代碼），再通過 API 手冊(cè)或配套軟件查詢代碼對(duì)應(yīng)的菌種。
四、結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)（核心試驗(yàn)）
無論使用鑒定管還是鑒定條，關(guān)鍵生化試驗(yàn)的判讀標(biāo)準(zhǔn)一致，需重點(diǎn)關(guān)注以下項(xiàng)目：
生化試驗(yàn) 陽性（+）結(jié)果 陰性（-）結(jié)果 沙門氏菌典型反應(yīng)
葡萄糖發(fā)酵 培養(yǎng)基變黃（產(chǎn)酸），小倒管有氣泡（產(chǎn)氣） 培養(yǎng)基仍為紫色，無氣泡 +（產(chǎn)酸產(chǎn)氣）
乳糖發(fā)酵 培養(yǎng)基變黃，小倒管有氣泡 培養(yǎng)基紫色，無氣泡
硫化氫（H?S） 培養(yǎng)基沿穿刺線出現(xiàn)黑色沉淀（FeS） 無黑色沉淀，培養(yǎng)基不變色
尿素酶 培養(yǎng)基變紅（尿素分解產(chǎn)氨，pH 升高） 培養(yǎng)基仍為黃色或橙色
枸櫞酸鹽利用 斜面培養(yǎng)基由綠色變?yōu)樗{(lán)色 仍為綠色
吲哚 加入試劑后變?yōu)槊倒寮t色 無顏色變化（仍為黃色）
動(dòng)力 細(xì)菌沿穿刺線擴(kuò)散生長(zhǎng)，半固體瓊脂渾濁 僅沿穿刺線生長(zhǎng)，周圍清澈
五、關(guān)鍵注意事項(xiàng)
菌株純度是前提：必須挑取單個(gè)典型菌落進(jìn)行純培養(yǎng)，若含雜菌（如
大腸桿菌污染），會(huì)導(dǎo)致乳糖發(fā)酵假陽性，干擾結(jié)果。
菌量與濁度控制：菌液過?。岫龋?.5 麥?zhǔn)希?huì)導(dǎo)致反應(yīng)弱陽性或假陰性；過濃可能導(dǎo)致假陽性，需嚴(yán)格按說明書校準(zhǔn)。
培養(yǎng)條件精準(zhǔn)：溫度需穩(wěn)定在 36±1℃（低于 35℃會(huì)抑制 H?S 產(chǎn)生，高于 37℃可能影響酶活性）；培養(yǎng)時(shí)間不可過長(zhǎng)（如超過 24 小時(shí)，沙門氏菌可能少量分解乳糖，導(dǎo)致假陽性）。
試劑時(shí)效性：鑒定條 / 鑒定管需在有效期內(nèi)使用，配套試劑需避光保存，開封后短期內(nèi)使用。
結(jié)果驗(yàn)證：生化鑒定陽性后，需結(jié)合血清學(xué)試驗(yàn)（如沙門氏菌 O 抗原、H 抗原檢測(cè)）進(jìn)一步確認(rèn)，避免與生化特性相似的菌屬混淆。
通過以上步驟，可準(zhǔn)確通過生化鑒定條或成套鑒定管確認(rèn)
沙門氏菌，兩類工具的選擇需結(jié)合實(shí)驗(yàn)室樣本量、效率需求和成本預(yù)算 —— 傳統(tǒng)鑒定管成本低但操作繁瑣，適合少量樣本；商品化鑒定條高效標(biāo)準(zhǔn)化，適合批量鑒定。
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