蠟樣芽胞桿菌溶血試驗與溶菌酶耐性試驗的操作步驟！
小楊 / 2025-12-31 10:29:31
蠟樣芽胞桿菌（Bacillus cereus）的溶血試驗與溶菌酶耐性試驗是其在微生物學(xué)鑒定中的重要生化特性檢測，用于輔助判斷其種屬歸屬。
一、溶血試驗（Hemolysis Test）
溶血試驗是檢測細(xì)菌是否產(chǎn)生并分泌溶血素（Hemolysin）的試驗，該毒素能破壞紅細(xì)胞膜，導(dǎo)致紅細(xì)胞破裂。根據(jù)溶血現(xiàn)象的不同，可將其分為三類。
1、原理
蠟樣芽胞桿菌能夠產(chǎn)生一種或多種溶血素，如磷脂酶 C（Phospholipase C）和神經(jīng)氨酸酶（Neuraminidase）等。這些酶類會作用于紅細(xì)胞膜上的脂質(zhì)成分，導(dǎo)致紅細(xì)胞溶解。
2、方法
培養(yǎng)基：通常使用血瓊脂平板，最常用的是含 5% 綿羊紅細(xì)胞的哥倫比亞血瓊脂。
操作步驟：
用接種環(huán)挑取純培養(yǎng)的蠟樣芽胞桿菌菌落，在血瓊脂平板上進(jìn)行分區(qū)劃線，以獲得單個菌落。
將平板置于 35-37°C 的需氧環(huán)境中，培養(yǎng) 18-24 小時。
觀察菌落周圍是否出現(xiàn)透明或不透明的溶血環(huán)。
3、結(jié)果判斷
α- 溶血（草綠色溶血）：菌落周圍出現(xiàn)草綠色的環(huán)帶。這是由于血紅蛋白被還原為高鐵血紅蛋白所致。蠟樣芽胞桿菌通常不表現(xiàn)為典型的 α- 溶血。
β- 溶血（完全溶血）：菌落周圍出現(xiàn)透明、清晰的環(huán)帶，紅細(xì)胞完全被溶解，環(huán)帶內(nèi)無殘留的紅細(xì)胞。蠟樣芽胞桿菌的大多數(shù)菌株在血瓊脂上會表現(xiàn)出β- 溶血，這是其一個重要的特征。
γ- 溶血（不溶血）：菌落周圍無任何溶血環(huán)，紅細(xì)胞未被破壞。蠟樣芽胞桿菌一般不表現(xiàn)為 γ- 溶血。
4、注意事項
培養(yǎng)基中的紅細(xì)胞必須新鮮，否則會影響溶血現(xiàn)象的觀察。
培養(yǎng)溫度和時間必須嚴(yán)格控制，以確保溶血素的充分產(chǎn)生。
試驗結(jié)果應(yīng)結(jié)合其他生化試驗和形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行綜合判斷，不能僅憑溶血試驗結(jié)果下定論。
二、溶菌酶耐性試驗（Lysozyme Resistance Test）
溶菌酶（Lysozyme）是一種能夠水解細(xì)菌細(xì)胞壁中肽聚糖（Peptidoglycan）的酶，可導(dǎo)致細(xì)菌裂解死亡。
蠟樣芽胞桿菌對溶菌酶具有較強(qiáng)的抵抗力，這是其與其他一些芽胞桿菌的重要區(qū)別之一。
1、原理
蠟樣芽胞桿菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)特殊，其肽聚糖層較厚，且在肽聚糖與細(xì)胞膜之間存在一層磷壁酸和肽聚糖連接物，這些結(jié)構(gòu)可以阻礙溶菌酶的滲透和作用，使其能夠在含溶菌酶的環(huán)境中存活。
2、方法
培養(yǎng)基：通常使用營養(yǎng)肉湯（Nutrient Broth）或胰蛋白胨大豆肉湯（Tryptic Soy Broth, TSB）。
操作步驟：
配制含不同濃度溶菌酶的肉湯培養(yǎng)基。常用的濃度為500 μg/mL或1000 μg/mL。
挑取純培養(yǎng)的蠟樣芽胞桿菌菌落，接種到含溶菌酶的肉湯中。
同時設(shè)置一個不含溶菌酶的肉湯作為陽性對照。
將所有試管置于 35-37°C 的需氧環(huán)境中，進(jìn)行振蕩培養(yǎng)（約 150-200 rpm）。
每隔一段時間（如每小時），用無菌接種環(huán)蘸取少量菌液，在血瓊脂平板上進(jìn)行劃線接種，觀察是否有細(xì)菌生長。
3、結(jié)果判斷
耐溶菌酶：在含溶菌酶的肉湯中，經(jīng)過一定時間培養(yǎng)后，血瓊脂平板上仍能觀察到蠟樣芽胞桿菌的菌落生長。這表明該菌株對溶菌酶具有耐受性。
不耐溶菌酶：在含溶菌酶的肉湯中，經(jīng)過相同時間培養(yǎng)后，血瓊脂平板上無細(xì)菌生長，或僅有極少量菌落生長。這表明該菌株對溶菌酶敏感。
4、注意事項
溶菌酶的濃度必須準(zhǔn)確配制，濃度過低可能無法有效抑制敏感菌株的生長，濃度過高則可能對某些耐受性強(qiáng)的菌株也產(chǎn)生抑制作用。
培養(yǎng)過程中必須進(jìn)行振蕩，以保證溶菌酶與細(xì)菌充分接觸，并為細(xì)菌提供充足的氧氣。
接種和觀察過程中要嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，避免污染。
三、臨床意義
蠟樣芽胞桿菌是一種條件致病菌，可引起食物中毒、傷口感染、敗血癥等多種疾病。
溶血試驗：β- 溶血是蠟樣芽胞桿菌的一個重要特征，可作為其初步鑒定的依據(jù)之一。
溶菌酶耐性試驗：該試驗可用于區(qū)分蠟樣芽胞桿菌與其他一些對溶菌酶敏感的芽胞桿菌，如
枯草芽胞桿菌（Bacillus subtilis）等。
四、總結(jié)
試驗名稱 原理 結(jié)果判斷
溶血試驗 檢測細(xì)菌產(chǎn)生的溶血素 β- 溶血：菌落周圍出現(xiàn)透明環(huán)（蠟樣芽胞桿菌的典型特征）。
溶菌酶耐性試驗 檢測細(xì)菌對溶菌酶的抵抗力 耐溶菌酶：在含溶菌酶的肉湯中，細(xì)菌仍能生長。
這兩項試驗是微生物學(xué)實驗室中鑒定
蠟樣芽胞桿菌的常用生化方法，結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察和其他生化試驗，可以更準(zhǔn)確地確定細(xì)菌的種屬。
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