培養(yǎng)基的貯藏操作手冊(cè)之操作方法與常見問(wèn)題及解決方案！
小楊 / 2026-01-15 09:43:48
百歐博偉生物：本手冊(cè)遵循微生物檢測(cè)與細(xì)胞培養(yǎng)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，涵蓋培養(yǎng)基貯藏的原理、操作方法、注意事項(xiàng)、常見問(wèn)題與解決方案，適用于實(shí)驗(yàn)室及檢測(cè)機(jī)構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)化管理。
一、貯藏原理
培養(yǎng)基的核心成分包含碳源、氮源、維生素、無(wú)機(jī)鹽、凝固劑（如瓊脂）等，其穩(wěn)定性受溫度、光照、濕度、氧氣等因素影響：
低溫可降低微生物污染風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)抑制培養(yǎng)基內(nèi)酶促反應(yīng)和成分降解（如維生素氧化、pH 漂移）。
避光可防止光敏成分（如核黃素、葉酸、血紅素）分解失效。
密封保存能避免水分揮發(fā)導(dǎo)致培養(yǎng)基濃度變化，同時(shí)隔絕外界雜菌污染。
不同狀態(tài)的培養(yǎng)基（干粉、配好的液體/固體），因水分活度差異，貯藏條件需差異化設(shè)置。
二、操作方法
1、干粉培養(yǎng)基的貯藏
干粉培養(yǎng)基是未溶解的半成品，穩(wěn)定性最高，操作流程如下：
包裝檢查：驗(yàn)收時(shí)確認(rèn)外包裝無(wú)破損、無(wú)受潮、無(wú)漏粉，內(nèi)袋密封完好。
貯藏條件
溫度：2℃~25℃ 陰涼干燥環(huán)境，避免高溫高濕（如遠(yuǎn)離烘箱、水浴鍋、水槽）。
光照：置于避光倉(cāng)庫(kù)或遮光柜，防止陽(yáng)光直射。
擺放：按批次、有效期分類堆放，遵循“先進(jìn)先出”原則，堆放高度不超過(guò)內(nèi)袋承壓上限。
貯藏期限：嚴(yán)格遵循廠家說(shuō)明書，未開封干粉培養(yǎng)基通?？少A藏 1~2 年；開封后需在1 個(gè)月內(nèi)用完。
開封后處理：開封后及時(shí)夾緊袋口，放入自封袋中密封，貼上開封日期標(biāo)簽；每次取用使用無(wú)菌干燥器具，避免帶入水分和雜菌。
2、已配制液體培養(yǎng)基的貯藏
（1）未滅菌液體培養(yǎng)基
適用場(chǎng)景：配好后暫未滅菌的培養(yǎng)基。
貯藏條件：2℃~8℃ 冷藏，24 h 內(nèi)必須完成滅菌，嚴(yán)禁長(zhǎng)時(shí)間存放。
注意：冷藏后若出現(xiàn)渾濁、沉淀（非溫度導(dǎo)致的可逆沉淀除外），說(shuō)明已污染，需廢棄。
（2）滅菌后液體培養(yǎng)基
適用場(chǎng)景：高壓蒸汽滅菌后的液體培養(yǎng)基（如肉湯培養(yǎng)基）。
貯藏條件
短期貯藏（≤7 天）：2℃~8℃ 冷藏，密封于無(wú)菌三角瓶或試管中，瓶口用無(wú)菌塞或封口膜密封。
長(zhǎng)期貯藏（＞7 天）：建議分裝至無(wú)菌容器后，置于 -20℃ 冷凍保存；避免反復(fù)凍融，可按需分裝為小體積。
解凍方法：冷凍培養(yǎng)基需在 37℃~45℃ 水浴中緩慢解凍，完全融化后輕輕混勻，未用完的解凍培養(yǎng)基需在 24 h 內(nèi)使用。
3、已配制固體培養(yǎng)基的貯藏
（1）平板培養(yǎng)基
制備后處理：滅菌倒平板冷卻凝固后，立即用無(wú)菌封口膜或平板套密封。
貯藏條件：2℃~8℃ 冷藏，避光保存；堆疊高度不超過(guò) 10 層，防止平板變形、培養(yǎng)基開裂。
貯藏期限：≤7 天；若平板中添加了抗生素、血清等不穩(wěn)定成分，需在 24~48 h 內(nèi)使用。
預(yù)熱使用：使用前從冰箱取出，置于 37℃ 恒溫箱中預(yù)熱 30 min，避免低溫平板影響微生物或細(xì)胞生長(zhǎng)。
（2）斜面培養(yǎng)基
制備后處理：滅菌擺成斜面冷卻凝固后，試管口用棉塞 + 牛皮紙包扎，或用螺口蓋擰緊。
貯藏條件：2℃~8℃ 冷藏，直立放置，防止培養(yǎng)基滑落堵塞試管口。
貯藏期限：≤1 個(gè)月；使用前需檢查斜面是否干燥、有無(wú)雜菌污染。
三、注意事項(xiàng)
嚴(yán)禁混放：培養(yǎng)基需與消毒劑、化學(xué)試劑、有毒物質(zhì)分開貯藏，防止污染和成分變質(zhì)。
溫度監(jiān)控：貯藏環(huán)境需配備溫度計(jì)，每日記錄溫度；冷藏/冷凍設(shè)備需定期校準(zhǔn)，防止溫度波動(dòng)。
污染排查：取用培養(yǎng)基前，需肉眼觀察外觀 —— 若出現(xiàn)渾濁、異味、菌落、顏色異常變化，立即廢棄。
特殊培養(yǎng)基處理
含血清、抗生素、酶制劑等不穩(wěn)定成分的培養(yǎng)基，需現(xiàn)配現(xiàn)用；若需貯藏，需在 4℃ 冷藏且 ≤24 h。
選擇性培養(yǎng)基（如含膽鹽、染料的培養(yǎng)基），避光貯藏，防止選擇性成分失效。
安全操作：冷凍培養(yǎng)基解凍時(shí)，避免水浴溫度過(guò)高導(dǎo)致成分破壞；高溫滅菌后的培養(yǎng)基需冷卻至室溫后再冷藏，防止容器因熱脹冷縮破裂。
四、常見問(wèn)題與解決方案
常見問(wèn)題 可能原因 解決方案
干粉培養(yǎng)基結(jié)塊、吸潮 貯藏環(huán)境濕度高、包裝破損 1.轉(zhuǎn)移至干燥環(huán)境，結(jié)塊輕微且未變質(zhì)可過(guò)篩后使用；2.結(jié)塊嚴(yán)重或吸潮發(fā)霉直接廢棄；3.更換密封性能更好的包裝。
滅菌后液體培養(yǎng)基渾濁 1.滅菌不徹底；2.貯藏過(guò)程中污染；3.溫度過(guò)低導(dǎo)致鹽類析出 1.渾濁伴隨異味→廢棄；2.低溫析出→37℃水浴溶解后觀察，若恢復(fù)澄清可使用；3.優(yōu)化滅菌參數(shù)，加強(qiáng)貯藏容器密封。
平板培養(yǎng)基開裂、干燥 1. 貯藏溫度過(guò)低；2. 密封不嚴(yán)水分揮發(fā) 1.控制冷藏溫度在 2℃~8℃，避免低于 0℃；2.加厚封口膜，減少取用次數(shù)；3.開裂嚴(yán)重的平板禁止使用。
培養(yǎng)基 pH 漂移 1.貯藏時(shí)間過(guò)長(zhǎng)；2.密封不嚴(yán)接觸二氧化碳 1.縮短貯藏時(shí)間，優(yōu)先使用新鮮培養(yǎng)基；2.密封貯藏，取用后及時(shí)封口；3.使用前檢測(cè) pH，必要時(shí)用無(wú)菌酸堿溶液微調(diào)。
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