沙門(mén)氏菌血清學(xué)鑒定的操作流程與注意事項(xiàng)及應(yīng)用場(chǎng)景！
小楊 / 2026-02-11 11:32:09
沙門(mén)氏菌的血清學(xué)鑒定是基于抗原抗體特異性結(jié)合反應(yīng)的分型技術(shù)，核心是利用沙門(mén)氏菌的O 抗原（菌體抗原）、H 抗原（鞭毛抗原）和Vi 抗原（包膜抗原）進(jìn)行血清分型，是
沙門(mén)氏菌分類(lèi)鑒定、溯源和流行病學(xué)調(diào)查的關(guān)鍵手段。
一、沙門(mén)氏菌主要抗原特性
O 抗原
成分：脂多糖（LPS），位于細(xì)胞壁外層，性質(zhì)穩(wěn)定，經(jīng)加熱（100℃ 2h）不被破壞。
分型意義：是沙門(mén)氏菌分群的依據(jù)，目前已發(fā)現(xiàn)超過(guò) 60 種 O 抗原，用阿拉伯?dāng)?shù)字編號(hào)，不同血清群對(duì)應(yīng)特定 O 抗原組合。
注意：部分菌株的 O 抗原可發(fā)生變異，導(dǎo)致血清定型偏差。
H 抗原
成分：蛋白質(zhì)，位于鞭毛上，性質(zhì)不穩(wěn)定，加熱或酒精處理后易破壞。
分型意義：是沙門(mén)氏菌分型的依據(jù)，分為第 1 相（特異相） 和第 2 相（非特異相），用英文字母或數(shù)字表示。
特點(diǎn)：部分沙門(mén)氏菌可出現(xiàn)單相菌（僅表達(dá) 1 相 H 抗原）或雙相菌（在不同培養(yǎng)條件下表達(dá)不同相 H 抗原）。
Vi 抗原
成分：酸性多糖，位于 O 抗原外層，覆蓋部分 O 抗原位點(diǎn)。
分布：主要存在于傷寒沙門(mén)氏菌、丙型副傷寒沙門(mén)氏菌等少數(shù)菌株。
影響：Vi 抗原陽(yáng)性菌株會(huì)阻斷 O 抗原與對(duì)應(yīng)抗血清的凝集反應(yīng)，需先去除 Vi 抗原再進(jìn)行 O 抗原定型。
二、血清學(xué)鑒定操作流程
以玻片凝集法（常用快速定型方法）為例，適用于純培養(yǎng)菌株的鑒定。
前期準(zhǔn)備
菌株純化：將待檢沙門(mén)氏菌接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂或血瓊脂平板，37℃培養(yǎng) 18~24h，挑取單個(gè)菌落進(jìn)行純培養(yǎng)。
試劑準(zhǔn)備：沙門(mén)氏菌診斷血清（成套 O 多價(jià)血清、O 單價(jià)血清、H 多價(jià)血清、H 單價(jià)血清、Vi 抗原診斷血清）、生理鹽水、潔凈玻片、接種環(huán)、酒精燈。
抗原處理（針對(duì) Vi 抗原陽(yáng)性菌株）：挑取菌落混懸于生理鹽水，100℃水浴加熱 30min，破壞 Vi 抗原；或使用 Vi 抗原診斷血清確認(rèn)后，再進(jìn)行 O 抗原定型。
O 抗原定型(1)取潔凈玻片 1 張，用記號(hào)筆劃分 2 個(gè)區(qū)域，標(biāo)記“待檢菌”和“陰性對(duì)照”。(2)在待檢菌區(qū)滴加 1 滴O 多價(jià)診斷血清，陰性對(duì)照區(qū)滴加 1 滴生理鹽水。(3)用接種環(huán)挑取待檢菌菌落，分別混懸于血清和生理鹽水滴中，輕輕晃動(dòng)玻片，觀(guān)察 1~2min。(4)若待檢菌區(qū)出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的顆粒狀凝集，陰性對(duì)照區(qū)無(wú)凝集，說(shuō)明 O 抗原陽(yáng)性；若不凝集，需重復(fù)試驗(yàn)或確認(rèn)是否為 Vi 抗原阻斷。(5)陽(yáng)性菌株進(jìn)一步用O 單價(jià)診斷血清逐一檢測(cè)，確定具體 O 抗原群。
H 抗原定型(1)對(duì)于雙相菌，需先誘導(dǎo)相轉(zhuǎn)變：將菌株接種于半固體培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng) 24h，取邊緣菌落（易表達(dá)第 2 相 H 抗原）或中心菌落（易表達(dá)第 1 相 H 抗原）進(jìn)行檢測(cè)。(2)玻片分區(qū)，滴加H 多價(jià)診斷血清和生理鹽水（陰性對(duì)照），混懸菌落后觀(guān)察凝集反應(yīng)。(3)陽(yáng)性菌株依次用第 1 相 H 單價(jià)血清和第 2 相 H 單價(jià)血清檢測(cè)，確定 H 抗原的相型。(4)若僅與某一相 H 血清凝集，為單相菌；若與兩相 H 血清均凝集，為雙相菌。
Vi 抗原定型取待檢菌混懸于生理鹽水，滴加 Vi 抗原診斷血清，若出現(xiàn)凝集，說(shuō)明 Vi 抗原陽(yáng)性；此時(shí)需加熱處理菌株后重新進(jìn)行 O 抗原定型。
結(jié)果判定根據(jù) O 抗原群和 H 抗原型的組合，對(duì)照沙門(mén)氏菌血清分型表，確定菌株的血清型（如傷寒沙門(mén)氏菌：O9，Hd；豬霍亂沙門(mén)氏菌：O6,7，Hc:1,5）。
三、注意事項(xiàng)
菌株純度：必須使用純培養(yǎng)的單個(gè)菌落，若存在雜菌會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性凝集，需重新純化菌株。
血清效價(jià)：診斷血清需在有效期內(nèi)使用，使用前恢復(fù)至室溫，避免因溫度過(guò)低影響抗原抗體結(jié)合。
菌液濃度：菌懸液濃度不宜過(guò)高，否則易出現(xiàn)假陰性（抗原過(guò)剩）；混懸時(shí)動(dòng)作輕柔，避免用力過(guò)猛破壞抗原。
陰性對(duì)照：每次試驗(yàn)必須設(shè)置生理鹽水陰性對(duì)照，排除菌液自身凝集的干擾；若對(duì)照出現(xiàn)凝集，試驗(yàn)無(wú)效。
相誘導(dǎo)：雙相菌的 H 抗原相轉(zhuǎn)變需借助半固體培養(yǎng)基，若直接用營(yíng)養(yǎng)瓊脂菌落檢測(cè)，可能僅檢測(cè)到單一相抗原。
四、質(zhì)量控制要點(diǎn)
陽(yáng)性對(duì)照：每次試驗(yàn)需同步使用已知血清型的沙門(mén)氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株作為陽(yáng)性對(duì)照，驗(yàn)證診斷血清的有效性。
血清保存：診斷血清需按說(shuō)明書(shū)保存（通常 2~8℃冷藏，避免反復(fù)凍融），使用前搖勻，出現(xiàn)渾濁、沉淀的血清禁止使用。
操作標(biāo)準(zhǔn)化：嚴(yán)格控制反應(yīng)時(shí)間（1~2min），避免反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致非特異性凝集；讀取結(jié)果時(shí)以自然光下肉眼觀(guān)察為準(zhǔn)。
結(jié)果復(fù)核：對(duì)疑似菌株或凝集反應(yīng)不典型的菌株，需用試管凝集法進(jìn)行定量復(fù)核，試管凝集法的靈敏度更高，結(jié)果更準(zhǔn)確。
五、常見(jiàn)問(wèn)題/失效原因分析
O 抗原不凝集
原因 1：菌株為 Vi 抗原陽(yáng)性，未進(jìn)行加熱處理，O 抗原位點(diǎn)被覆蓋。
原因 2：菌懸液濃度過(guò)高，出現(xiàn)抗原過(guò)剩（前帶現(xiàn)象）。
原因 3：診斷血清效價(jià)不足或過(guò)期。
解決：加熱破壞 Vi 抗原；稀釋菌懸液；更換新效價(jià)血清。
H 抗原不凝集
原因 1：未進(jìn)行相誘導(dǎo)，雙相菌僅表達(dá)其中一相抗原。
原因 2：H 抗原易被破壞，接種環(huán)溫度過(guò)高或菌懸液加熱處理。
解決：用半固體培養(yǎng)基誘導(dǎo)相轉(zhuǎn)變；使用未加熱的新鮮菌落進(jìn)行檢測(cè)。
陰性對(duì)照出現(xiàn)凝集
原因 1：菌液自身凝集（菌株為粗糙型菌落，細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)異常）。
原因 2：玻片未清洗干凈，殘留血清或雜質(zhì)。
解決：挑取光滑型菌落重新試驗(yàn)；使用潔凈玻片，試驗(yàn)前用生理鹽水沖洗。
非特異性凝集
原因：反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、血清濃度過(guò)高、環(huán)境溫度過(guò)高。
解決：嚴(yán)格控制反應(yīng)時(shí)間；按說(shuō)明書(shū)稀釋血清；在室溫（20~25℃）下進(jìn)行試驗(yàn)。
六、應(yīng)用場(chǎng)景
臨床診斷：對(duì)患者糞便、血液、尿液等標(biāo)本中分離的沙門(mén)氏菌進(jìn)行分型，明確感染菌株的血清型，輔助診斷傷寒、副傷寒或食物中毒。
食品安全檢測(cè)：對(duì)食品中污染的沙門(mén)氏菌進(jìn)行血清分型，追溯污染源頭，指導(dǎo)食品安全管控。
流行病學(xué)調(diào)查：通過(guò)監(jiān)測(cè)不同地區(qū)、不同時(shí)間沙門(mén)氏菌血清型的分布，分析菌株的傳播規(guī)律，為疫情防控提供數(shù)據(jù)支持。
菌株鑒定與分類(lèi)：作為沙門(mén)氏菌分類(lèi)的金標(biāo)準(zhǔn)之一，補(bǔ)充生化鑒定的結(jié)果，實(shí)現(xiàn)菌株的精準(zhǔn)分型。
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