聚多曲霉：主要用于釀造白酒和產(chǎn)脂肪酶
小楊 / 2024-01-11 09:44:44
聚多曲霉，又名喜多式曲霉，屬于散囊菌目發(fā)菌科曲霉屬的一種真菌?？缮L(zhǎng)在土壤、糞、酒曲、食品、望遠(yuǎn)鏡筒內(nèi)壁及各種材料的基物上。主要用于釀造白酒和產(chǎn)脂肪酶。
一、菌種簡(jiǎn)介
規(guī)格：凍干粉
拉丁屬名：Aspergillus Sydowii
拉丁名稱(chēng)：Aspergillus sydowii
來(lái)源歷史：←山東食品發(fā)酵工業(yè)研究設(shè)計(jì)院
收藏時(shí)間：2017/5/22
原始編號(hào)：BJ-MJ-3
原產(chǎn)國(guó)：中國(guó)
資源歸類(lèi)編碼：15151913102
模式菌株：非模式菌株
主要用途：研究
特征特性：菌絲有隔，孢梗莖細(xì)長(zhǎng)，分生孢子頭呈球狀，向外散射。孢子呈圓形；菌落中間白周?chē)l(fā)紅，產(chǎn)色素，反面呈暗紅色。
具體用途：釀造白酒，產(chǎn)脂肪酶。
生物危害程度：四類(lèi)
培養(yǎng)基編號(hào)：CM0015
培養(yǎng)基名稱(chēng)：查氏瓊脂(Czapek's Agar)
培養(yǎng)基成分：蔗糖 30.0g，NaNO3 3.0g，MgSO4·7H2O 0.5g，KCl 0.5g，F(xiàn)eSO4·4H2O 0.01g，K2HPO4 1.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH6.0～6.5。
培養(yǎng)溫度：28℃
需氧類(lèi)型：好氧
分離基物：白酒大曲曲塊
采集地：山東省淄博市高青縣
保存方法：-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法
共享方式：公益性共享；資源純交易性共享；合作研究共享；資源交換性共享
提供形式：凍干物
用途：釀造白酒，產(chǎn)脂肪酶。
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫(kù)為準(zhǔn)）
二、形態(tài)描述
菌落在查氏瓊脂上25℃7天直徑約22mm， 10-12天25-40mm，質(zhì)地為絲絨狀至絮狀，致密；顏色呈灰藍(lán)色至暗藍(lán)色，初期稍淡，老后漸深，近于暗藍(lán)灰綠色（Dark Bluish Gray Green,R.XLII）。
白屈菜綠至蒿綠（Celandine Green-→ Artemesia Green,R.XLVII）或板瓦橄欖色（Slate Olive,R.XLVII），間或有淡褐色區(qū)域；有輻射形溝紋；通常具大量滲出液，褐色至暗褐色：無(wú)氣味或具輕微霉味；菌落反面呈淡褐或暗褐色至醬色，近于栗色（Maroon,R.I）或醬紅色（Bay,R.II），色素?cái)U(kuò)散于基質(zhì)中。分生孢子頭球形至輻射形，一般直徑為52-125μm，小分生孢子頭似青霉?fàn)?，呈疏松柱形或散亂；分生孢子梗直接生于基質(zhì)或生于氣生菌絲，孢梗莖長(zhǎng)度自幾十微米至500μm，一般140-210μm，直徑（3.5-）4-8μm，壁較厚，光滑；頂囊較小，近球形或稍呈橢圓形，直徑8-15（-20）μm，幾乎全部表面可育；產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)雙層：?；?.2-）6-7（-10.4）μm×2-3.5（-4）μm，瓶梗（4.2-）6-8（-10）μm×2-3μm，有的小分生孢子頭僅分生孢梗莖頂端稍膨大后生出產(chǎn)孢細(xì)胞，有時(shí)還可見(jiàn)氣生菌絲上直接生有瓶梗；分生孢子為球形或近球形，直徑2.5-3.5（-5）μm，壁明顯粗糙，具小刺。
菌落在查氏酵母膏瓊脂上25℃7天直徑15-30mm，10-14無(wú)可達(dá)40mm；質(zhì)地絲絨狀至厚絮狀；邊緣白色，2-3mm，內(nèi)部暗藍(lán)綠色，近于深藍(lán)灰綠（Deep Bluish Gray Green,R.XLII）或暗俄羅斯綠至暗藍(lán)灰綠（Dark Russian Green--Dark Bluish Gray Green,R.XLII）；有時(shí)具較稀的輻射狀溝紋；滲出液深褐色，出現(xiàn)于中央的溝紋部分；菌落反面褐色至深褐色，色素稍擴(kuò)散于基質(zhì)。
三、培養(yǎng)方法
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長(zhǎng)基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級(jí)種）、原種（二級(jí)種）和栽培種（三級(jí)種）三級(jí)。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱(chēng)種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過(guò)擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過(guò)程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無(wú)菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長(zhǎng)時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對(duì)于霉菌類(lèi)孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類(lèi)的天然培養(yǎng)基）。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長(zhǎng)、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無(wú)機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無(wú)雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。
四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
1、稱(chēng)量→溶化→調(diào)ph→過(guò)濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無(wú)菌檢查
2、干熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開(kāi)箱取物
3、高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無(wú)菌檢查
4、過(guò)濾除菌：組裝滅菌→連接→壓濾→無(wú)菌檢查→清洗滅菌
五、保存方法
1、傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過(guò)高，營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長(zhǎng)溫度為好。
2、懸液保存法：
①蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。
②糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長(zhǎng)達(dá)10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。
3、載體保存法：土壤保存法；砂土保存法；硅膠保存法；磁珠保存法；麩皮保存法；紙片(濾紙)保存法。
4、常用的冷凍保存法：
①低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過(guò)多，有些可添加保護(hù)劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來(lái)吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。
②干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。
③液氮保存法(-196℃)：是適用范圍最廣的微生物保存法。
六、注意事項(xiàng)
1）凍干首次活化，干粉要全部用完，不能預(yù)留，用 0.1-0.2ml 的培養(yǎng)液或無(wú)菌水溶解，接種在 2 支斜面上，因凍干粉處于休眠狀態(tài)，請(qǐng)勿接種多支斜面或平板，以避免因接種量不足而導(dǎo)致復(fù)蘇不成功；如有不明白之處，請(qǐng)務(wù)必先咨詢我單位技術(shù)人員，避免不必要的損失；
2）微生物菌種應(yīng)保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致菌種衰退；
3）菌種操作應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行；轉(zhuǎn)種完畢，應(yīng)經(jīng)滅菌再做丟棄處理；
4）應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時(shí)轉(zhuǎn)接，凍干菌種保藏時(shí)間通常為 2-25 年；
5）菌種使用過(guò)程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降，應(yīng)及時(shí)和
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七、單層凍干管打管說(shuō)明書(shū)
1、安瓿瓶開(kāi)封：用浸過(guò) 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3滴）無(wú)菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端并將凍干管開(kāi)口處在火焰上過(guò)一遍，并保持在火焰旁操作。
2、注意事項(xiàng)：菌種活化前，請(qǐng)將安瓿管保存在 4-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥并抽真空保存的，，開(kāi)啟后必須一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作為保護(hù)劑，里面菌體為少數(shù)，復(fù)蘇時(shí)要全部菌懸液接在新鮮培養(yǎng)基上，否則可能造成復(fù)蘇不成功；
3、凍干菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥保存后處于休眠狀態(tài)，有時(shí)延滯期較長(zhǎng)，如在說(shuō)明書(shū)建議的培養(yǎng)時(shí)間還未長(zhǎng)起來(lái)，請(qǐng)繼續(xù)在相應(yīng)的環(huán)境下多培養(yǎng) 24 小時(shí)或者更長(zhǎng)時(shí)間，直至菌種培養(yǎng)完成；有的菌種需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長(zhǎng)，一般來(lái)說(shuō)，菌種穩(wěn)定后才能用于您的后續(xù)實(shí)驗(yàn)。暫不啟開(kāi)的安瓿管應(yīng)于 4℃中保藏（特殊除外）。凍干管打開(kāi)后需一次用完，不能留存。打管操作需由專(zhuān)業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)的防護(hù)設(shè)備中進(jìn)行，生物危害程度為三類(lèi)的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作，打管時(shí)凍干管應(yīng)遠(yuǎn)離面部，保護(hù)眼睛。
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