如何避免在微生物實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)空白對照平板長菌的情況？
小楊 / 2025-08-18 09:51:27
百歐博偉生物：在微生物實(shí)驗(yàn)中，避免空白對照平板長菌的核心是從源頭控制污染，需結(jié)合培養(yǎng)基制備、無菌操作、環(huán)境管理等全流程進(jìn)行規(guī)范。以下是具體的預(yù)防措施：
一、確保培養(yǎng)基及相關(guān)試劑的無菌性
1、嚴(yán)格滅菌參數(shù)
分裝培養(yǎng)基時(shí)，體積不超過容器的 1/2，避免滅菌時(shí)受熱不均；分裝后立即滅菌，不可長時(shí)間存放（尤其是富含營養(yǎng)的培養(yǎng)基，易滋生微生物）。
稀釋液（如生理鹽水、PBS）需單獨(dú)滅菌，采用高壓蒸汽滅菌或過濾滅菌（針對不耐熱試劑），滅菌后密封儲(chǔ)存，避免反復(fù)開蓋使用。
2、驗(yàn)證滅菌效果
定期對滅菌后的培養(yǎng)基進(jìn)行無菌性檢測：取少量培養(yǎng)基（如 5-10mL）接種到空白平板或液體培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng) 24-48 小時(shí)，觀察是否長菌。
檢查滅菌設(shè)備：定期校準(zhǔn)滅菌器的溫度、壓力傳感器，確保顯示值與實(shí)際一致；滅菌前徹底排盡冷空氣（如滅菌器排氣閥打開至有連續(xù)蒸汽排出）。
二、規(guī)范無菌操作，減少人為污染
1、優(yōu)化操作環(huán)境
所有操作（如倒平板、接種、開蓋）需在超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行，提前 30 分鐘開啟工作臺(tái)通風(fēng)，并用紫外燈照射 30 分鐘消毒；定期檢測 HEPA 濾網(wǎng)（每 3-6 個(gè)月），確保過濾效率（0.3μm 顆粒截留率≥99.97%）。
非工作臺(tái)操作時(shí)（如運(yùn)輸平板），避免在塵埃多、人員密集的環(huán)境中暴露平板，減少氣流擾動(dòng)。
2、嚴(yán)格人員操作規(guī)范
實(shí)驗(yàn)前：用 75% 酒精擦拭雙手、前臂及工作臺(tái)面；穿戴無菌手套、口罩、實(shí)驗(yàn)服（袖口收緊），避免頭發(fā)、皮膚暴露。
倒平板時(shí)：
三角瓶瓶口經(jīng)酒精燈火焰灼燒滅菌（避免直接灼燒培養(yǎng)基），傾斜培養(yǎng)皿，僅打開 1/3-1/2 蓋子，快速倒平板（約 15-20mL / 皿），立即蓋緊蓋子。
倒完后輕輕晃動(dòng)平板，使培養(yǎng)基均勻鋪展，待凝固后倒置（避免冷凝水滴落污染表面）。
平板處理：拿取培養(yǎng)皿時(shí)捏邊緣，不觸碰蓋子內(nèi)側(cè)或培養(yǎng)基表面；避免在平板上方說話、咳嗽，頭部偏離平板 10cm 以上。
3、確保器具無菌
培養(yǎng)皿、移液管、三角瓶等器具需經(jīng)干熱滅菌（160-170℃，2-3 小時(shí)）或高壓蒸汽滅菌，滅菌后密封保存（如培養(yǎng)皿用無菌包裝袋封裝），使用前檢查包裝是否破損。
重復(fù)使用的器具（如移液管）需徹底清洗后再滅菌，避免殘留有機(jī)物滋生微生物。
三、清潔與維護(hù)培養(yǎng)及儲(chǔ)存環(huán)境
1、培養(yǎng)箱的日常管理
每周用 75% 酒精擦拭培養(yǎng)箱內(nèi)壁、隔板及托盤，每月用含氯消毒劑（如 500mg/L 次氯酸鈉）徹底消毒 1 次，清除殘留微生物。
定期檢查培養(yǎng)箱溫度、濕度，避免積水（托盤及時(shí)倒水），防止霉菌滋生；培養(yǎng)時(shí)確保平板蓋子蓋緊，避免與其他污染平板直接接觸。
2、儲(chǔ)存環(huán)境控制
滅菌后的培養(yǎng)基（未倒平板）需在 4℃冰箱密封保存，存放時(shí)間不超過 1 周（避免冷凝水回流污染）；倒好的空白平板需倒置儲(chǔ)存在無菌保鮮盒中，1-2 天內(nèi)使用完畢。
實(shí)驗(yàn)臺(tái)、冰箱等區(qū)域定期清潔，避免堆放雜物，減少微生物滋生的“死角”。
四、建立污染預(yù)警與追溯機(jī)制
1、設(shè)置多重對照
除空白平板（未接種樣品）外，可增設(shè)“操作對照”（如僅倒平板、模擬接種操作但不加入樣品），輔助判斷污染來源（是培養(yǎng)基本身還是操作污染）。
2、記錄與排查
詳細(xì)記錄實(shí)驗(yàn)日期、培養(yǎng)基批次、滅菌參數(shù)、操作人員、培養(yǎng)條件等信息，若出現(xiàn)污染可快速追溯環(huán)節(jié)（如同一批次培養(yǎng)基多組空白污染，優(yōu)先排查滅菌問題）。
3、定期培訓(xùn)與考核
對實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行無菌操作培訓(xùn)，重點(diǎn)強(qiáng)調(diào)倒平板、開蓋、環(huán)境清潔等關(guān)鍵步驟；通過模擬實(shí)驗(yàn)考核操作規(guī)范性，減少人為失誤。
通過以上措施，可從“滅菌徹底性、操作規(guī)范性、環(huán)境潔凈度”三個(gè)維度降低污染風(fēng)險(xiǎn)，確保空白對照平板的無菌性，為實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性提供保障。
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