藥品微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的對(duì)象與分類及法規(guī)依據(jù)與發(fā)展趨勢！
小楊 / 2025-08-19 09:33:51
百歐博偉生物：藥品微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)是用于監(jiān)測藥品及其生產(chǎn)相關(guān)環(huán)節(jié)中微生物污染情況，確保藥品質(zhì)量與用藥安全的關(guān)鍵技術(shù)體系。其核心目的是通過科學(xué)方法檢測藥品中微生物的種類、數(shù)量及污染風(fēng)險(xiǎn)，防止因微生物污染導(dǎo)致藥品變質(zhì)、藥效降低或引發(fā)患者感染（如敗血癥、過敏反應(yīng)等）。
一、檢驗(yàn)對(duì)象
藥品微生物學(xué)檢驗(yàn)的對(duì)象廣泛，涵蓋藥品全生命周期及生產(chǎn)鏈條，主要包括：
藥品本身：原料（如中藥材、化學(xué)原料藥）、輔料（如淀粉、防腐劑）、制劑（如注射劑、口服片劑、軟膏劑等）。
生產(chǎn)相關(guān)環(huán)節(jié)：生產(chǎn)環(huán)境（空氣、表面）、生產(chǎn)設(shè)備、包裝材料、操作人員手部及衣物衛(wèi)生等（這些環(huán)節(jié)的微生物污染是藥品污染的重要源頭）。
二、常用檢驗(yàn)技術(shù)分類
根據(jù)技術(shù)原理和發(fā)展階段，可分為傳統(tǒng)檢驗(yàn)技術(shù)和現(xiàn)代快速檢驗(yàn)技術(shù)。
（一）傳統(tǒng)檢驗(yàn)技術(shù)（經(jīng)典方法，藥典主要收錄）
傳統(tǒng)方法基于微生物的培養(yǎng)特性，雖耗時(shí)較長（通常需 2-7 天），但因穩(wěn)定性和可靠性，仍是各國藥典的法定方法。
1、微生物計(jì)數(shù)
用于測定藥品中活菌總數(shù)，評(píng)估總體污染水平，包括：
總活菌數(shù)計(jì)數(shù)：采用平板傾注法或涂布法，將樣品稀釋后接種至營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，30-35℃培養(yǎng) 48-72 小時(shí)，計(jì)數(shù)菌落數(shù)（CFU/g 或 CFU/mL）。
霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)：使用沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，20-25℃培養(yǎng) 5-7 天，計(jì)數(shù)真菌菌落，避免真菌代謝產(chǎn)物（如毒素）對(duì)人體的危害。
2、控制菌檢查
原理：通過選擇性培養(yǎng)基（如
麥康凱瓊脂用于篩選革蘭氏陰性菌）和特異性生化反應(yīng)（如
大腸桿菌的靛基質(zhì)試驗(yàn)），結(jié)合形態(tài)觀察確認(rèn)目標(biāo)菌。
3、無菌檢查
針對(duì)“無菌制劑”（如注射劑、植入劑、眼用制劑等）的關(guān)鍵檢驗(yàn)，要求樣品中不得檢出任何活菌。
方法：將樣品接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（需氧和厭氧菌）和改良馬丁培養(yǎng)基（真菌），培養(yǎng) 14 天（中國藥典要求），觀察是否有菌生長（如渾濁、產(chǎn)氣、菌落形成）。
關(guān)鍵：需在無菌操作環(huán)境（如隔離器、生物安全柜）中進(jìn)行，避免環(huán)境微生物干擾。
（二）現(xiàn)代快速檢驗(yàn)技術(shù)（彌補(bǔ)傳統(tǒng)方法耗時(shí)缺陷）
隨著藥品生產(chǎn)效率提升和風(fēng)險(xiǎn)控制需求，快速檢測技術(shù)逐漸應(yīng)用，可將檢測時(shí)間縮短至數(shù)小時(shí)至 1 天，主要包括：
1、分子生物學(xué)技術(shù)
基于微生物核酸（DNA/RNA）的特異性檢測，靈敏度高（可檢測單個(gè)拷貝基因）。
PCR 技術(shù)：通過擴(kuò)增特定微生物的保守基因（如
大腸桿菌的 uidA 基因），實(shí)現(xiàn)定性或定量檢測；實(shí)時(shí)熒光定量 PCR（qPCR）可通過熒光信號(hào)強(qiáng)度定量微生物數(shù)量。
基因芯片技術(shù)：將多種微生物的特異性探針固定在芯片上，一次可檢測數(shù)十至數(shù)百種微生物，適合多目標(biāo)篩查。
2、免疫學(xué)技術(shù)
利用抗原 - 抗體特異性結(jié)合檢測目標(biāo)微生物，操作簡便。
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）：將微生物抗原（或抗體）固定在板上，通過酶標(biāo)記的抗體（或抗原）顯色，根據(jù)吸光度判斷是否存在目標(biāo)菌（如檢測
沙門氏菌）。
免疫層析試紙條：快速可視化檢測，適合現(xiàn)場篩查（如
金黃色葡萄球菌腸毒素檢測）。
3、儀器與物理化學(xué)方法
ATP 生物發(fā)光法：活菌含有的 ATP（三磷酸腺苷）可與熒光素 - 熒光素酶反應(yīng)產(chǎn)生發(fā)光，通過發(fā)光強(qiáng)度快速定量活菌總數(shù)（15-30 分鐘出結(jié)果），常用于生產(chǎn)環(huán)境衛(wèi)生監(jiān)控。
流式細(xì)胞術(shù)（FCM）：通過熒光標(biāo)記活菌，流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)熒光信號(hào)細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)快速活菌定量。
基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜：通過分析微生物蛋白質(zhì)指紋圖譜，快速鑒定微生物種類（1-2 小時(shí)），替代傳統(tǒng)生化鑒定（需 2-3 天）。
三、檢驗(yàn)關(guān)鍵環(huán)節(jié)
1、樣品采集與處理
樣品需具有代表性（如隨機(jī)抽樣、覆蓋不同批次 / 包裝）；
若藥品含抑菌成分（如抗生素、防腐劑），需通過稀釋、添加中和劑或薄膜過濾（截留微生物，去除抑菌成分）消除干擾。
2、培養(yǎng)基與試劑質(zhì)量控制
培養(yǎng)基需驗(yàn)證無菌性、適用性（如對(duì)目標(biāo)菌的促生長能力）；
試劑（如染色液、抗體）需校準(zhǔn)有效期和靈敏度。
3、結(jié)果驗(yàn)證
設(shè)立陽性對(duì)照（已知目標(biāo)菌）和陰性對(duì)照（無菌樣品），確保方法有效性；
對(duì)可疑結(jié)果需重復(fù)試驗(yàn)或采用其他方法交叉驗(yàn)證（如傳統(tǒng)培養(yǎng) + PCR 確認(rèn)）。
四、法規(guī)依據(jù)
藥品微生物檢驗(yàn)需嚴(yán)格遵循各國藥典及法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)，核心依據(jù)包括：
中國藥典（ChP）：四部收載“微生物限度檢查法”“無菌檢查法”“控制菌檢查法”等；
美國藥典（USP）：<61> 微生物計(jì)數(shù)、<62 > 控制菌、<71 > 無菌檢查；
歐洲藥典（EP）：2.6.12 微生物計(jì)數(shù)、2.6.13 控制菌、2.6.1 無菌檢查。
五、發(fā)展趨勢
自動(dòng)化與智能化：全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)、AI 輔助結(jié)果判讀，減少人為誤差；
多目標(biāo)同步檢測：芯片技術(shù)、多重 PCR 實(shí)現(xiàn)一次檢測多種致病菌；
現(xiàn)場快速檢測：便攜設(shè)備（如手持 ATP 檢測儀）用于生產(chǎn)車間實(shí)時(shí)監(jiān)控；
風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警結(jié)合：通過大數(shù)據(jù)分析生產(chǎn)環(huán)節(jié)微生物污染規(guī)律，提前預(yù)防風(fēng)險(xiǎn)。
藥品微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)是藥品質(zhì)量安全的“防火墻”，其發(fā)展既依賴于基礎(chǔ)微生物學(xué)的進(jìn)步，也需緊密結(jié)合制藥工業(yè)的實(shí)際需求，最終實(shí)現(xiàn)對(duì)藥品微生物污染的精準(zhǔn)、高效控制。
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