食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)中培養(yǎng)基質(zhì)量控制的全操作流程！
小楊 / 2025-09-20 13:31:28
百歐博偉生物：食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)中，培養(yǎng)基的質(zhì)量控制是確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠的核心環(huán)節(jié)，直接決定了微生物計(jì)數(shù)、分離和鑒定的有效性，任何環(huán)節(jié)的失控都可能導(dǎo)致誤判或漏檢。
培養(yǎng)基質(zhì)量控制需貫穿“制備前 - 制備中 - 制備后 - 使用時(shí)”全流程，每個(gè)階段都有明確的控制要點(diǎn)和標(biāo)準(zhǔn)。
一、制備前：源頭控制（關(guān)鍵在于“合規(guī)”）
此階段重點(diǎn)是確保培養(yǎng)基原料和制備環(huán)境符合要求，從源頭規(guī)避質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)。
1、培養(yǎng)基原料驗(yàn)收
外觀檢查：查看干粉培養(yǎng)基是否有潮解、結(jié)塊、變色、異味等情況，如有異常直接報(bào)廢。
資質(zhì)核查：確認(rèn)生產(chǎn)廠家具備《食品相關(guān)產(chǎn)品生產(chǎn)許可證》，每批次需提供出廠檢驗(yàn)報(bào)告（COA），報(bào)告中需包含無菌性、促生長能力等關(guān)鍵指標(biāo)。
批次抽檢：對(duì)每批次新購入的培養(yǎng)基，需隨機(jī)抽取 1-2 瓶進(jìn)行性能驗(yàn)證（如促生長試驗(yàn)），合格后方可入庫使用。
2、制備用水要求
必須使用純化水或蒸餾水，避免水中的微生物、礦物質(zhì)（如鈣、鎂離子）或有機(jī)物影響培養(yǎng)基性能。
用水需符合《GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法》中二級(jí)水的要求，使用前需檢測電導(dǎo)率（≤1.0μS/cm，25℃）和微生物限度（≤100CFU/mL）。
3、器具與環(huán)境消毒
配制培養(yǎng)基的燒杯、量筒、玻璃棒等器具需經(jīng)干熱滅菌（160-180℃，2-3h） 或高壓蒸汽滅菌（121℃，15-30min） 處理，冷卻后備用。
配制環(huán)境需在無菌室或超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行，環(huán)境空氣潔凈度需達(dá)到百級(jí)（浮游菌≤5CFU/m³），操作前需對(duì)臺(tái)面進(jìn)行 75% 乙醇擦拭消毒。
二、制備過程：精準(zhǔn)操作（關(guān)鍵在于“參數(shù)”）
此階段需嚴(yán)格控制溶解、滅菌、pH 調(diào)節(jié)等關(guān)鍵步驟，確保培養(yǎng)基成分穩(wěn)定、性能達(dá)標(biāo)。
1、稱量與溶解
按照培養(yǎng)基說明書的推薦用量精準(zhǔn)稱量，使用經(jīng)校準(zhǔn)的分析天平（精度≥0.01g），避免因稱量誤差導(dǎo)致營養(yǎng)成分濃度不當(dāng)。
溶解時(shí)需先將干粉培養(yǎng)基緩慢加入水中，邊加邊攪拌，直至完全溶解，避免結(jié)塊（結(jié)塊會(huì)導(dǎo)致滅菌不徹底）。對(duì)于難溶解的培養(yǎng)基（如
麥康凱瓊脂），可適當(dāng)加熱（≤60℃）輔助溶解，但需避免長時(shí)間高溫破壞營養(yǎng)成分。
2、pH 值調(diào)節(jié)
溶解后需在室溫（25℃左右） 下用 pH 計(jì)（經(jīng)校準(zhǔn)）測量 pH 值，根據(jù)說明書要求調(diào)節(jié)（如
營養(yǎng)瓊脂 pH 值需控制在 7.2-7.4）。
調(diào)節(jié)時(shí)使用無菌的 1mol/L 鹽酸或 1mol/L 氫氧化鈉溶液，逐滴加入并攪拌均勻，避免 pH 值波動(dòng)過大。
3、滅菌控制
不同類型的培養(yǎng)基需采用不同的滅菌參數(shù)，嚴(yán)禁所有培養(yǎng)基統(tǒng)一用“121℃，30min”滅菌，否則會(huì)破壞成分。常見培養(yǎng)基滅菌參數(shù)如下表：
培養(yǎng)基類型 滅菌溫度 滅菌時(shí)間 備注
營養(yǎng)瓊脂、LB 瓊脂 121℃ 15min 常規(guī)非選擇性培養(yǎng)基
麥康凱瓊脂 121℃ 15min 選擇性培養(yǎng)基，滅菌后需冷卻至 45-50℃再倒平板
含糖培養(yǎng)基（如葡萄糖瓊脂） 115℃ 20min 高溫會(huì)導(dǎo)致糖分解，影響 pH 值
卵黃瓊脂 100℃以下 煮沸溶解 需采用“間歇滅菌法”，避免卵黃成分凝固
滅菌后需立即取出，避免長時(shí)間放置在滅菌鍋內(nèi)導(dǎo)致過度加熱。對(duì)于需添加無菌成分（如抗生素、血清）的培養(yǎng)基，需先冷卻至 45-50℃，再無菌操作加入，搖勻后倒平板。
三、制備后：性能驗(yàn)證（關(guān)鍵在于“檢測”）
此階段是判斷培養(yǎng)基是否合格的核心，需通過無菌性、促生長能力、選擇性等指標(biāo)驗(yàn)證，不合格的培養(yǎng)基嚴(yán)禁使用。
1、無菌性檢查
每批次制備好的培養(yǎng)基，需隨機(jī)抽取 3-5 個(gè)平板（或試管），在36℃±1℃ 培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng) 48h。
培養(yǎng)后觀察，若平板上無任何菌落生長，說明無菌性合格；若出現(xiàn)菌落，需排查滅菌參數(shù)、操作污染等原因，整批次培養(yǎng)基報(bào)廢。
2、促生長能力驗(yàn)證
取 0.1mL 菌懸液接種到待檢培養(yǎng)基平板上，涂布均勻后在適宜溫度下培養(yǎng)（如細(xì)菌 36℃±1℃，48h），同時(shí)用合格的對(duì)照培養(yǎng)基（同批次已驗(yàn)證合格或標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基）做平行試驗(yàn)。
要求待檢培養(yǎng)基上的菌落數(shù)與對(duì)照培養(yǎng)基的菌落數(shù)差值不超過 10%，且菌落形態(tài)正常（如
大腸埃希氏菌菌落呈圓形、乳白色、邊緣整齊），說明促生長能力合格。
3、選擇性與鑒別能力驗(yàn)證
培養(yǎng)后觀察：目標(biāo)菌應(yīng)正常生長（
大腸埃希氏菌在麥康凱瓊脂上呈紅色菌落），非目標(biāo)菌應(yīng)被抑制（
金黃色葡萄球菌不生長或生長微弱），說明選擇性合格。
針對(duì)鑒別培養(yǎng)基（如
伊紅美藍(lán)瓊脂），目標(biāo)菌應(yīng)呈現(xiàn)特征性菌落（如
大腸埃希氏菌呈紫黑色、有金屬光澤），說明鑒別能力合格。
4、外觀與凝固性檢查
瓊脂類培養(yǎng)基冷卻后應(yīng)凝固良好，倒置時(shí)無流淌現(xiàn)象；若凝固不良，可能是瓊脂添加量不足或滅菌時(shí)過度加熱導(dǎo)致瓊脂分解。
四、儲(chǔ)存與使用：過程維護(hù)（關(guān)鍵在于“時(shí)效”）
1、儲(chǔ)存條件
制備好的培養(yǎng)基需在2-8℃ 冰箱中密封儲(chǔ)存，避免與其他物品交叉污染，儲(chǔ)存時(shí)間一般不超過 1 個(gè)月（具體以說明書為準(zhǔn)）。
干粉培養(yǎng)基需在陰涼干燥處（溫度≤25℃，相對(duì)濕度≤60%）密封保存，避免潮解，保質(zhì)期以包裝上的生產(chǎn)日期為準(zhǔn)。
2、使用前檢查
從冰箱取出的培養(yǎng)基需在室溫下放置 30min，待表面冷凝水干燥后再使用；若冷凝水過多，可倒置在 36℃培養(yǎng)箱中烘干 15-30min。
使用前再次檢查外觀：若出現(xiàn)變色、發(fā)霉、凝固不良等情況，立即廢棄。
3、使用記錄
建立完整的培養(yǎng)基質(zhì)量控制記錄，包括：原料名稱、批次號(hào)、制備日期、滅菌參數(shù)、pH 值、各項(xiàng)驗(yàn)證結(jié)果、使用日期及操作人員等，記錄需至少保存 1 年，便于追溯。
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