中國微生物菌種查詢網(wǎng)真菌感染在臨床上頗為常見。它不僅包括侵犯表皮角質(zhì)層、毛發(fā)和甲板的淺部真菌感染，包括侵犯真皮、皮下組織和內(nèi)臟器官的深部真菌病。近20年來，在臨床上隨著廣譜抗生素、免抑制劑、細胞毒藥物的廣泛應(yīng)用；．器官移植、導(dǎo)管技術(shù)及靜脈高營養(yǎng)等技術(shù)的開展；嚴重疾病惡性腫瘤、糖尿病和艾滋病等使免疫缺陷宿主不斷增多，真菌感染率，特別是系統(tǒng)性條件致病真菌的感染率在不斷上升。實驗室檢查是臨床診斷真菌感染的重要依據(jù)，常規(guī)的實驗室診斷法包括：直接鏡檢法和培養(yǎng)法、病理學(xué)方法、血清學(xué)方法和分子生物學(xué)方法。本文就這幾方面進行綜述。
一、直接鏡檢法和培養(yǎng)法
直接鏡檢法和培養(yǎng)檢查法是形態(tài)學(xué)檢查的基本方法，直接鏡檢是真菌學(xué)檢查最經(jīng)典的方法,具有快速、簡便的特點。但陽性率較低，1次取材直接涂片法的漏診率高達45％，而3次取材直接鏡檢的累積陽性率可達99％，因此，陰性結(jié)果不能排除診斷，與培養(yǎng)檢查結(jié)合才能確診。培養(yǎng)檢查法可進—步提高病原體檢出的陽性率，驗證直接鏡檢的結(jié)果，同時確定致病菌的種類。某些真菌感染的組織寄生形態(tài)具有特征性，對于診斷具有重要意義，如念珠菌感染在組織中可以同時發(fā)現(xiàn)酵母細胞和假菌絲：隱球菌感染可見帶有莢膜的酵母細胞：曲霉菌感染可見五色、45°分支分隔的菌絲：毛霉菌感染可見粗大無分隔呈直角分支的菌絲；組織細胞內(nèi)的酵母細胞常提示組織胞漿菌或馬爾尼菲青霉菌感染：棕色菌絲和／或孢子常提示暗色真菌感染。通過碘酸-雪文氏染色PAS和銀染等特殊染色可以更清楚地顯示真菌細胞。
根據(jù)研究應(yīng)用顯色培養(yǎng)法，經(jīng)37°C孵育48h觀察菌落色澤和形態(tài)即可做出鑒定，陽性率為88．6％。為了提高念珠菌屬血培養(yǎng)陽性串，最重要的進展是使用解離離心管和血培養(yǎng)自動監(jiān)測培養(yǎng)瓶。解離離心管主要是通過溶細胞混合物將巨噬細胞中吞噬的真菌成份釋放，并且將補體和一些影響真菌細胞活力的抗微生物因子滅活，然后進行培養(yǎng)。這種方法能夠縮短多器官受累患者血培養(yǎng)陽性的時間，但價格昂貴。血培養(yǎng)自動監(jiān)系統(tǒng)目前有BacT／ALERT 3D和BACTEC9240 2種，前者在有氧培養(yǎng)基上檢出光滑念珠菌時間明顯縮短。此外，還有一些可以連續(xù)測定壓力變化的血培養(yǎng)系統(tǒng)。除血培養(yǎng)外，其他體液如尿液也可以進行培養(yǎng)，不過其陽性結(jié)果應(yīng)當(dāng)結(jié)合患者病情和治療情況。
二、組織病理學(xué)檢查
組織病理學(xué)檢查對于確定致病菌在組織內(nèi)寄生并了解宿主的反應(yīng)十分重要，而且一旦在組織切片中發(fā)現(xiàn)真菌菌絲和／或孢子，即為診斷的有力證據(jù)。其結(jié)果與直接鏡檢和培養(yǎng)相結(jié)合對診斷的意義更大。除常用的真菌病原體染色方法外，免疫組化特異抗體染色可對臨床常見條件致病菌做出特異性診斷。馬蕾等采用微波Envision免疫組化二步法對34例深部真菌病患者的標本用福爾馬林固定，石蠟包埋切片進行PAS染色，微波Envision免疫組織化學(xué)標記。結(jié)果示免疫組織化學(xué)染色16例為可疑曲霉菌感染中14例陽性；11例可疑隱球菌感染全部陽性；7例念珠菌感染6例陽性。菌體染色清晰無背景。因此，微波Envision免疫組化二步法應(yīng)用于深部真菌感染檢測具有高敏感、低背景、快速簡便的特點，在真菌病的臨床病理診斷中具有很好的應(yīng)用價值。有學(xué)者指出免疫組化方法較PAS方法可特異地對白色念珠菌、新型隱球菌和曲霉菌感染作出診斷。