金黃色葡萄球菌是一種人畜共患病的重要致病菌，由于其形狀為球型，在顯微鏡下排列成葡萄串狀而得名，該菌廣泛存在于空氣、水、塵埃及人和動(dòng)物的排泄物中。因而，食品及食品原料受其污染的機(jī)會(huì)很多。金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生多種致病性物質(zhì)，如腸毒素及凝固酶等。金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒是一個(gè)全球性公共衛(wèi)生問(wèn)題，據(jù)美國(guó)疾病預(yù)防控制中心報(bào)告，由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒僅次于大腸埃希菌，居第2位，占細(xì)菌性食物中毒的33％，加拿大的發(fā)生率更高，占細(xì)菌性食物中毒的45％。我國(guó)每年發(fā)生的此類(lèi)中毒事件也非常多，最容易感染金黃色葡萄球菌的食物包括肉類(lèi)、禽類(lèi)、蛋類(lèi)、水產(chǎn)類(lèi)、奶及其制品等，因此大多數(shù)食品及食品原料，均須按國(guó)家規(guī)定要求進(jìn)行金黃色葡萄球菌的檢測(cè)。
目前，我國(guó)對(duì)金黃色葡萄球菌最常用的檢測(cè)方法是常規(guī)培養(yǎng)法，經(jīng)過(guò)分離培養(yǎng)、形態(tài)特征觀(guān)察及一系列生理生化鑒定，包括血漿凝固酶試驗(yàn)和毒素檢測(cè)試驗(yàn)等，到最終的檢測(cè)報(bào)告至少需要3～5天，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且容易導(dǎo)致送檢貨物積壓而造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，對(duì)金黃色葡萄球菌的檢測(cè)迫切需要更快速、更簡(jiǎn)易、更準(zhǔn)確的方法，快速測(cè)試片法因其自身具有的輕便、快速、簡(jiǎn)易的優(yōu)勢(shì)而成為未來(lái)微生物檢測(cè)中較有前景的重要手段之一。廣州綠洲生化科技股份有限公司生產(chǎn)的金黃色葡萄球菌測(cè)試片(見(jiàn)圖1)，是以法國(guó)進(jìn)口的金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基為主要原料，運(yùn)用微生物測(cè)試片專(zhuān)有技術(shù)，具有顯色培養(yǎng)基靈敏、特異和高選擇性，及紙片法方便、經(jīng)濟(jì)與快捷的優(yōu)點(diǎn)，可以滿(mǎn)足食品中金黃色葡萄球菌快速檢測(cè)需要的一次性快速測(cè)試片。
驗(yàn)證試驗(yàn)
金黃色葡萄球菌測(cè)試片特異性試驗(yàn)
將金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、糞大腸菌、阪崎腸桿菌、副溶血弧菌、蠟樣芽胞桿菌、大腸桿菌0157、腸炎沙門(mén)氏菌、陰溝腸桿菌、糞鏈球菌及銅綠假單胞菌標(biāo)準(zhǔn)菌株純化復(fù)壯后，挑取單個(gè)菌落接種到營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面，培養(yǎng)過(guò)夜后用生理鹽水洗脫，制成適宜濃度的菌懸液。分別吸取以上菌懸液1mL，滴加到金黃色葡萄球菌測(cè)試片上，每個(gè)菌株接種兩片作為重復(fù)，經(jīng)(36±1)℃培養(yǎng)24h后，觀(guān)察記錄細(xì)菌生長(zhǎng)情況。只有金黃色葡萄球菌呈現(xiàn)典型的紫紅色菌斑，其余大部分非目的菌在測(cè)試片上不生長(zhǎng)，少部分如大腸桿菌顯示為藍(lán)色菌斑，均明顯區(qū)別于目的菌，說(shuō)明測(cè)試片具有良好的特異性。金黃色葡萄球菌測(cè)試片靈敏度試驗(yàn)
挑取純培養(yǎng)的金黃色葡萄球菌單個(gè)菌落，用無(wú)菌生理鹽水先制成麥?zhǔn)隙?.05MCF的菌懸液，再稀釋成適宜梯度后接種測(cè)試片，每個(gè)稀釋度均分別接種測(cè)試片兩張；同時(shí)以營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板計(jì)數(shù)法測(cè)定菌液的確切菌落數(shù)目，并進(jìn)行比較(結(jié)果見(jiàn)表1)。
從表1可以看出，金黃色葡萄球菌測(cè)試片對(duì)純菌的檢測(cè)靈敏度可達(dá)lcfu／mL，對(duì)菌落數(shù)目在0～9個(gè)范圍內(nèi)的菌液，測(cè)試片與平皿一樣均能檢測(cè)出來(lái)，測(cè)試片與傾注平板法相比，最小檢出量可提高一個(gè)稀釋梯度。同類(lèi)產(chǎn)品對(duì)比試驗(yàn)
目前國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)上有好幾種同類(lèi)的產(chǎn)品，本實(shí)驗(yàn)選取國(guó)外某知名品牌產(chǎn)品進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)。挑取純培養(yǎng)金黃色葡萄球菌單菌落，用無(wú)菌生理鹽水先制成0.05MCF的菌懸液，再稀釋成適宜梯度的菌懸液，分別吸取lmL接種到金黃色葡萄球菌測(cè)試片(Ⅰ號(hào))和國(guó)外某知名品牌產(chǎn)品(Ⅱ號(hào))上，置于(36±1)℃培養(yǎng)24h，觀(guān)察記錄結(jié)果。多次試驗(yàn)結(jié)果綜合記錄在表2中。
從表2中可以看出，金黃色葡萄球菌測(cè)試片與國(guó)外某知名品牌產(chǎn)品相比，多次試驗(yàn)結(jié)果相符率均在90％以上，4次試驗(yàn)結(jié)果平均相符率達(dá)到94.3％，兩個(gè)產(chǎn)品的檢測(cè)效果是一致的，而綠洲產(chǎn)品不需要用確認(rèn)片做確認(rèn)試驗(yàn)，使用更加簡(jiǎn)便和快捷。
測(cè)試片法與國(guó)標(biāo)方法的檢測(cè)比較
從市場(chǎng)上隨機(jī)購(gòu)買(mǎi)各種樣品，包括各種生熟肉制品、奶及奶制品、糕點(diǎn)等，首先經(jīng)GB 4789.10 2010標(biāo)準(zhǔn)方法檢測(cè)，證明為金黃色葡萄球菌呈陰性的樣品為陰性樣品。在陰性樣品中人為加入適當(dāng)濃度的金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌懸液，使樣品含菌量在10～102％fu／mL之間，為模擬陽(yáng)性樣品。用金黃色葡萄球菌測(cè)試片對(duì)陰性樣品和模擬陽(yáng)性樣品各20份進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)用國(guó)標(biāo)方法作對(duì)比試驗(yàn)，計(jì)算測(cè)試片法與國(guó)標(biāo)方法的符合率。結(jié)果見(jiàn)表3和表4。
在接種的40個(gè)樣品中，用國(guó)標(biāo)方法檢出結(jié)果金黃色葡萄球菌為陽(yáng)性的樣品有20份(全部為模擬陽(yáng)性樣品)，用測(cè)試片法檢出結(jié)果金黃色葡萄球菌為陽(yáng)性的樣品有21份(包括20份模擬陽(yáng)性樣品和1份假陽(yáng)性的陰性樣品)，兩者的陽(yáng)性符合率為95.2％，陰性符合率達(dá)到100％，整體符合率達(dá)到97.5％，測(cè)試片的檢出率要比國(guó)標(biāo)方法提高了2.5％，有效防止了漏檢現(xiàn)象的發(fā)生。結(jié)論
金黃色葡萄球菌測(cè)試片靈敏度高，特異性強(qiáng)，與國(guó)標(biāo)方法相比較符合率高，能廣泛適用于各類(lèi)食品及食品原料中金黃色葡萄球菌的檢驗(yàn)，作為一種快速方法，特別有利于大通量樣品初篩，可以作為國(guó)標(biāo)方法的有利補(bǔ)充。同時(shí)采用快速測(cè)試片法檢測(cè)樣品還具有其他的一些優(yōu)勢(shì)：省去了配制培養(yǎng)基、分裝滅菌等前處理和試驗(yàn)后清洗玻璃器皿等一系列繁雜的準(zhǔn)備和整理工作，能大幅度減少工作量；攜帶方便，檢測(cè)成本較低；操作簡(jiǎn)便迅速，對(duì)操作人員和檢驗(yàn)設(shè)備及場(chǎng)所的要求也不高，可在基層檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)或食品生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行推廣應(yīng)用。因此，該方法具有廣闊的市場(chǎng)應(yīng)用前景。