一、枯草桿菌普通化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備及轉(zhuǎn)化方法：
1) 將枯草芽孢桿菌菌種接種在LB平板上37 ℃培養(yǎng)1-2天，孢子形成率接近100%。
2) 用接種環(huán)接一環(huán)菌苔于5mL GM I 溶液，在30℃慢搖床（125 r/min）振蕩培養(yǎng)過夜。
3) 次日取2 mL轉(zhuǎn)接到18 mL GM I 中，37℃快搖床（250 r/min）培養(yǎng)3.5 h。
4) 再取10 mL上一步驟的培養(yǎng)液轉(zhuǎn)接到90 mL GM II 中，37℃慢搖床培養(yǎng)90 min后，5,000 g，10 min離心收集菌體。
5) 用10 mL原培養(yǎng)液上清液輕輕懸浮菌體，懸浮后的菌體即為感受態(tài)細(xì)胞可以直接用來轉(zhuǎn)化。
6) 感受態(tài)細(xì)胞的保存：加30%的滅菌甘油至終濃度為10%，混勻后分裝到離心管中（0.5 mL/tube），隨即放到-70 ℃保存。
7) 轉(zhuǎn)化時(shí)取出離心管，放在45 ℃水浴中溶化，然后在0.5 mL菌液中加入適量DNA（～1 ug/ml）。
8) 于37 ℃振蕩（200 r/min）培養(yǎng)30 -120 min后涂于相應(yīng)抗性平板，再在37 ℃培養(yǎng)過夜，檢查并驗(yàn)證轉(zhuǎn)化子。
二、備用試劑：
[1] 10×最低鹽溶液：K2HPO4 70 g，KH2PO4 30 g，（NH4）2SO4 10 g，（Na3C6H5O7?2H2O）5 g，MgSO4?7H2O 1 g，在蒸餾水中依次溶解，加水至500 mL。
[2] 氨基酸溶液（根據(jù)不同菌株的基因缺陷型準(zhǔn)備，如WB600的氨基酸是 L- trp溶液）：10 mg/mL，貯于棕色瓶內(nèi)，113℃滅菌30 min，用黑紙包裹。
[3] GM I溶液：1×最低鹽溶液95.6 mL，20%葡萄糖2.5 mL，5%水解酪蛋白0.4 mL，10%酵母汁（yeast extract）1 mL，10 mg/mL氨基酸溶液0.5 mL（50 μg/mL）。
[4] GM II溶液：1×最低鹽溶液96.98 mL，20%葡萄糖2.5 mL，5%水解酪蛋白0.08 mL，10%酵母汁（yeast extract）0.04 mL，1 M MgCl2 0.25 mL（2.5 mM），1 M CaCl2 0.05 mL（0.5 mM），10 mg/mL氨基酸溶液0.1 mL（5 μg/mL）。
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