中國微生物菌種查詢網(wǎng) 內(nèi)毒素(Endotoxin)是革蘭氏陰性菌的細胞壁外壁層上的特有結(jié)構(gòu)。細菌在生活狀態(tài)時不釋放出來，只有當細菌死亡自溶或粘附在其它細胞時才表現(xiàn)其毒性，內(nèi)毒素的主要化學成分是脂多糖（LPS）中的類脂A成分。LPS作為革蘭氏陰性菌細胞壁外膜的重要組分之一，是菌株血清分型的主要依據(jù)。
脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)由多糖O抗原、核心多糖和類脂A(lipid A)組成，位于最外層。多糖O抗原向外，由若干個低聚糖的重復(fù)單位組成的多糖鏈，即革蘭氏陰性菌的菌體抗原(O抗原)，有特異性。核心多糖由庚糖、半乳糖、2-酮基-3-脫氧辛酸(2-keto-3-deoxyoctonic acid，KDO)等組成，所有革蘭氏陰性細菌都有此結(jié)構(gòu)。類脂A是以脂化的葡萄胺二糖為單位，通過焦磷酸酯鍵組成的一種獨特的糖脂化合物，具有致熱作用，是革蘭氏陰性細菌內(nèi)毒素的毒性成分。
這里介紹幾種細菌脂多糖的提取方法。
一、熱酚水法
實驗原理：
熱酚水法是提取LPS的經(jīng)典方法，是基于破壞細菌細胞膜及利用苯酚析出蛋白質(zhì)。將細菌懸液加入熱酸——水混合液中，冷卻，離心?；旌弦嚎煞譃樗芤簩樱▋?nèi)含水溶性脂多糖及核酸等）和酸層（內(nèi)含蛋白質(zhì)等），近年來發(fā)現(xiàn)在酸層中也含糖類；沉淀中含細胞殘體。
實驗方法：
1、將細菌濃懸液用鹽水經(jīng)2500轉(zhuǎn)/分，離心20分鐘洗滌一次。
2、將沉淀的菌體混勻于蒸餾水中，放66℃水浴，然后滴加等量的90%熱酚溶液（預(yù)熱至66℃），邊加邊搖，而后在66℃水浴中攪拌25分鐘。
3、在水浴中冷卻，于4℃冰箱過夜。
4、以2000轉(zhuǎn)/分離心15分鐘。
5、將上層水溶液吸到另一試管中。
6、剩下的酚層及殘渣組分可再加上述同量水在熱水浴中攪拌30分鐘，冷卻，離心，取上層水溶液。
7、將兩次提的水溶液混合，置透析袋中于生理鹽水中透析2天，其間換幾次鹽水，以除去酚。
8、透析后的水溶液層經(jīng)濃縮（如用聚乙二醇在透析袋外層涂抹以除去水分），即為粗制脂多糖，于冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?br />
二、超聲波處理法
1、將細菌經(jīng)2500轉(zhuǎn)/分，離心20分鐘洗滌1-2次，將沉淀配成2倍于原始菌液濃度的濃菌液。
2、用超聲波發(fā)生器中頻（約相當于12000 cps）處理20分鐘。
3、處理液經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分，離心30分鐘，吸取上清液即為脂多糖，置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br />
三、煮沸法
1、將培養(yǎng)后得到的濃菌液沸水浴煮沸2小時。
2、置冰箱靜置兩星期以上（使菌體殘渣自由下沉）。
3、3000轉(zhuǎn)/分離心30分鐘，取上清夜即為粗脂多糖抗原，置冰箱中保存?zhèn)溆谩?br />