細(xì)胞增殖檢測的技術(shù)與應(yīng)用！
小楊 / 2020-09-17 08:33:21
一、背景
細(xì)胞增殖檢測是判定細(xì)胞活力的重要指標(biāo)，有多種顯示方法，除實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞計(jì)數(shù)法之外，還可以進(jìn)行細(xì)胞分裂指數(shù)的測定。細(xì)胞分裂是細(xì)胞增殖的方式，能比較確切地反映細(xì)胞增殖度。細(xì)胞增殖是指細(xì)胞在周期調(diào)控因子的作用下通過DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)合成等復(fù)雜反應(yīng)而進(jìn)行分裂的一系列過程。細(xì)胞增殖檢測技術(shù)廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、腫瘤生物學(xué)、免疫學(xué)、藥理和藥代動力學(xué)等研究領(lǐng)域。
二、檢測細(xì)胞增殖的技術(shù)主要包括：
1、滲透實(shí)驗(yàn)。這種方法用來染細(xì)胞膜破損的細(xì)胞，活細(xì)胞不會被臺盼藍(lán)染成藍(lán)色。然后通過細(xì)胞計(jì)數(shù)器手動計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)目。此方法快速、便宜、僅僅需要一少部分細(xì)胞。細(xì)胞傳代、凍存、或其它實(shí)驗(yàn)可以用這種方法?；蛘咭部梢酝ㄟ^流式細(xì)胞儀來計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)目。檢測前可以染PI排除死細(xì)胞。
2、直接增殖測定。這種方法利用DNA整合來測定細(xì)胞增殖。此方法利用整合到DNA中的放射性或非放射性的核酸類似物來檢測。比如：Brdu免疫化學(xué)染色法需要將細(xì)胞或組織標(biāo)本經(jīng)過變性處理，這就影響了標(biāo)本的結(jié)構(gòu),使標(biāo)本不適合下游實(shí)驗(yàn)，也使得染色結(jié)果及程度過分地依賴于不同實(shí)驗(yàn)所應(yīng)用的不同條件。
3、細(xì)胞代謝法。這種方法是將四唑鹽加入細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)，這些四唑鹽可以被活細(xì)胞轉(zhuǎn)化為有顏色的甲瓚，用酶聯(lián)免疫分析儀測定其光吸收值可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。此方法已廣泛用于各種細(xì)胞增殖的檢測,生物活性因子的活性檢測，大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選，細(xì)胞毒性試驗(yàn)等。
三、應(yīng)用
用于細(xì)胞膜熒光染料用于定量檢測體內(nèi)外細(xì)胞增殖和肝脂肪酶在腫瘤細(xì)胞耐藥中的作用研究：
在同一群腫瘤細(xì)胞中定量測定了各亞群細(xì)胞分裂次數(shù)，同時保持細(xì)胞完整性，可繼續(xù)進(jìn)行細(xì)胞功能的測定，也可提取細(xì)胞蛋白和RNA進(jìn)行測定。
有研究指出APOBEC3G,、CD133、LIPC和S100P在功能上調(diào)節(jié)大腸癌的肝轉(zhuǎn)移，其陽性預(yù)示著大腸癌存在肝轉(zhuǎn)移。另一項(xiàng)研究顯示非小細(xì)胞肺癌中LIPC表達(dá)水平可能具有一個獨(dú)立的預(yù)后價(jià)值。
因此,本實(shí)驗(yàn)利用這種新的DiO染色方法研究了LIPC在腫瘤細(xì)胞耐藥中的機(jī)制。主要方法及結(jié)果1DiO的研究1.1DiO和DiD同屬親脂性羰花青染料。它們是由兩個對稱的環(huán)，每個環(huán)連接一個長的碳?xì)滏湥h(huán)中間由奇數(shù)個次甲基連接構(gòu)成。雙環(huán)結(jié)構(gòu)及連接雙環(huán)的次甲基數(shù)目的不同決定了熒光分子的特性。
碳?xì)滏湹拈L短決定了它們與膜脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)的親疏性。DiO的最大吸收和釋放波長分別是484nm和501nnm,DiD的最大吸收和釋放波長分別是644nm和665nm。1.2MTT測定DiO染色后細(xì)胞的增值情況。
結(jié)果顯示DiO染色后Lovo、SW480、SW620、CT26、HepG2細(xì)胞在1、2、3天不影響其增殖P>0.05。
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